人源酪蛋白激酶Ⅱ催化亚基的构建及表达纯化

• 作者: 佟红娜 李彩虹 柏学 胡克平 高海
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 生物学
• 关键词: 原核表达 蛋白纯化 酪蛋白激酶Ⅱ csnk2a1 csnk2a2
• 年，卷（期）: 2020,（7）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1201-1205
• 页数: 5页
• 分类号: Q-33|Q78|Q814
• 语种: 中文
• DOI: 10.13241/j.cnki.pmb.2020.07.001

摘要

目的:构建人源CK2催化亚基pET-28a(+)-hcsnk2a1和pET-28a(+)-hcsnk2a2重组质粒,并进行原核表达纯化得到高纯度融合蛋白,为进一步开展CK2生理病理机制研究以及CK2作为肿瘤抑制靶点相关抑制剂的筛选和评价提供实验基础.方法:利用合成的人源csnk2a1和csnk2a2目的基因片段,将酶切连接得到的重组质粒经测序验证后,进行大肠杆菌感受态BL21 (DE3)/Transetta (DE3)转化.使用合适浓度IPTG诱导融合蛋白的表达以得到可溶性的融合蛋白,并应用AKTAavant蛋白纯化仪和Ni2+-NTA预装柱进行纯化,蛋白纯度最后经SDS-PAGE胶分离后考马斯亮蓝染色和Western Blot检测鉴定.结果:测序结果表明pET-28a(+)-hcsnk2a1和pET-28a(+)-hcsnk2a2质粒均成功被构建;经转化诱导表达后,成功纯化得到相对分子量为42KD的his-hcsnk2a1和38KD的his-hcsnk2a2目的融合蛋白.结论:首次成功构建得到pET-28a(+)-hcsnk2a1和pET-28a(+)-hcsnk2a2质粒;并表达纯化得到高浓度和高纯度的his-hcsnk2a1和his-hcsnk2a2融合蛋白,为后期的蛋白功能研究和抑制剂筛选评价提供了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李彩虹	中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所	2	2	1.0	1.0
2	柏学	中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所	1	0	0.0	0.0
3	佟红娜	中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所	1	0	0.0	0.0
4	胡克平	中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所	2	21	1.0	2.0
5	高海	复旦大学生物医学研究所	1	0	0.0	0.0