类弹性蛋白展示NT-proBNP双抗原表位重组蛋白的制备和纯化

• 作者: 丁宁 付鑫 朱静 杨春光 胡学军 龚福梅
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: N-端脑钠肽前体 类弹性蛋白 抗原表位 大肠杆菌 心力衰竭
• 年，卷（期）: 2020,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 458-463
• 页数: 6页
• 分类号: Q51
• 字数: 4670字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13481/j.1671-587x.20200305

摘要

目的:利用大肠杆菌(E.coli)高效制备类弹性蛋白(ELP)展示N端脑钠肽前体(NT-proBNP)双抗原表位的重组蛋白,为低成本、高效地制备NT-proBNP检测校准品提供依据.方法:分别设计NT-proBNP第13～20位和第63～71位氨基酸残基表位,通过柔链连接上述2个抗原表位与ELP融合,获得3种融合蛋白.利用基因工程技术合成编码以上3种融合蛋白的基因并克隆到pET-28a(+)载体上,转入E.coli BL21 (DE3)自动诱导表达,利用多次可逆相变循环(ITC)纯化重组蛋白,并应用Western blotting和ELISA法检测其抗体特异结合表位的能力.结果:成功构建了3种ELP展示NT-proBNP抗原表位的载体,并在E.coli中表达获得相应重组蛋白.Western blotting和直接ELISA检测,ELP展示的特异抗原表位均具有良好的与相应抗体结合的能力.夹心ELISA法检测,ELP展示NT-proBNP双抗原表位重组蛋白的蛋白浓度与450 nm处吸光度(A)值呈双对数线性剂量依赖关系(r=0.919 7,P＜0.01).结论:成功利用ELP展示NF-proBNP双抗原表位,为低成本、高效地制备出与NT-proBNP检测校准品奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	胡学军	大连大学医学研究中心	15	40	4.0	5.0
2	杨春光	大连大学医学研究中心	20	54	4.0	6.0
3	丁宁	大连大学医学研究中心	36	57	5.0	6.0
4	付鑫	大连大学医学研究中心	2	0	0.0	0.0
5	龚福梅	大连大学医学研究中心	1	0	0.0	0.0
6	朱静	大连大学医学研究中心	1	0	0.0	0.0