鸡Prox1基因重组真核表达载体的构建及其表达特征分析

• 作者: 周磊 段志强 胡焱 袁超 韩一帆 高洪波
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: Prox1(prospero-related homeobox protein 1)基因 鸡 生长发育 真核表达载体
• 年，卷（期）: 2020,（8）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 1450-1457
• 页数: 8页
• 分类号: S831.2
• 字数: 5858字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2020.08.012

摘要

Prox1(prospero-related homeobox protein 1)作为转录因子在胚胎发育过程中起关键调控作用.为探究鸡(Gallus gallus)Prox1蛋白亚细胞定位及其在鸡生长发育中的基因表达规律,本研究以前期构建的pCR2.1-Prox1克隆载体为基础,构建重组真核表达载体pEGFP-C1-Prox1,将其转染人(Homo sapien)胚胎肾细胞(HEK-293T),通过Western blot方法检测重组蛋白的表达,利用倒置荧光显微镜观察重组蛋白的亚细胞定位;采用qRT-PCR技术检测Prox1基因在鸡胚胎期14 d(E14 d)、0日龄(0 d)、7日龄(7 d)和14日龄(14 d)4个时间点各组织中的表达情况.结果显示,本研究成功构建了鸡Prox1基因的重组真核表达载体pEGFP-C1-Prox1,转染细胞后重组蛋白EGFP-Prox1成功表达;荧光观察显示,EGFP-Prox1重组蛋白主要定位在细胞核.qRT-PCR检测结果显示,在不同组织中,Prox1基因在鸡E14 d和7 d的胃中表达最高,0和14 d的肺脏中表达最高;在不同时间点的表达趋势显示,Prox1在眼球和大脑中表达稳定;心脏中在7 d后开始呈上升趋势;肝脏和肺脏中均在E14 d表达最低,在14 d表达最高,整体呈上升趋势;胃和腿肌中在E14 d表达最高,0 d表达最低,7 d有较高表达,呈W型表达趋势;胸肌中,从E14 d到7 d表达逐渐增加,之后开始下降,到14 d表达最低.本研究结果可为进一步研究Prox1基因参与调控鸡不同组织发育的机理提供参考依据.