志贺氏菌检测和分群实时荧光PCR方法的建立

• 作者: 催强 延涵 王海艳 赵治国 郝广福 陈林军 靳木子
• 来源期刊: 中国动物检疫
• 学科: 农学
• 关键词: 志贺氏菌 实时荧光PCR 检测和分群
• 年，卷（期）: 2020,（3）
• 所属期刊栏目: 技术支撑
• 页码范围: 109-114
• 页数: 6页
• 分类号: S851.34
• 字数: 3799字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2020.03.023

摘要

为对志贺氏菌属细菌进行快速、准确检测和分群鉴定,根据志贺氏菌invC、rfc、wbgZ和rfpB基因,分别设计引物和探针,建立了鉴定志贺氏菌属以及福氏志贺氏菌、宋内志贺氏菌和痢疾志贺菌氏菌实时荧光PCR方法,同时将根据ompA基因设计的引物和探针作为内参照,并通过特异性试验和人工接种试验等对该方法进行验证.结果显示,该方法对17株志贺氏菌和19株非志贺氏菌均出现100％ 的特异性;用增菌肉汤直接进行PCR检测,发现在消毒奶、冰淇淋、酸奶、奶酪、熟肉和香肠等即食食品中的志贺氏菌检出限为1～3 cfu/25 g(mL),在原奶、生肉和奶粉中的检出限分别为≤8 cfu/25 mL、12 cfu/25 g和≤12 cfu/25 g;分离培养后再对可疑菌落进行实时荧光PCR鉴定,发现所有样品的检出限为1～3 cfu/25 g(mL),与传统培养法检出限一致.结果表明,该实时荧光PCR方法是一个快速、敏感、特异的检测方法,适合于志贺氏菌的常规检测分析.