基于CRISPR-Cas9技术构建橡胶树胶孢炭疽菌的基因敲除系统

• 作者: 安邦 郭燕华
• 来源期刊: 微生物学通报
• 关键词: CRISPR-Cas9 橡胶树胶孢炭疽菌 基因敲除
• 年，卷（期）: 2020,（1）
• 所属期刊栏目: 农业微生物学
• 页码范围: 109-117
• 页数: 9页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13344/j.microbiol.china.190263

摘要

[背景]CRISPR-Cas9基因组编辑技术为病原真菌的基因敲除、敲入及定点编辑提供了新的思路.[目的]建立适用于橡胶树胶孢炭疽菌的CRISPR-Cas9基因敲除系统.[方法]通过大肠杆菌原核表达系统合成含有细胞核定位信号的Cas9蛋白;以URA5为靶标基因,预测该基因中Cas9的切割位点,并在体外转录合成相应的SgRNA;体外构建Cas9-SgRNA复合体,并将该复合体转入橡胶树胶孢炭疽菌原生质体;通过表型筛选及测序鉴定,筛选URA5的敲除突变体菌株.[结果]体外表达的Cas9蛋白与SgRNA能够形成复合体,并在体外对目标基因URA5的DNA序列进行切割;Cas9-SgRNA复合体能够成功转入橡胶树胶孢炭疽菌原生质体,并完成对URA5的敲除;敲除突变株表现出尿嘧啶缺陷表现型.[结论]建立了适用于橡胶树胶孢炭疽菌的基因敲除系统.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郭燕华	海南大学热带作物学院海南省热带生物资源可持续利用重点实验室	1	0	0.0	0.0
2	安邦	海南大学热带作物学院海南省热带生物资源可持续利用重点实验室	8	8	2.0	2.0