非洲猪瘟病毒pF317L在昆虫细胞中的表达及鉴定

• 作者: 宋欢欢 李向东 李胜强 王同燕 田克恭 白露露 颜世君
• 来源期刊: 黑龙江畜牧兽医（下半月）
• 学科: 农学
• 关键词: 非洲猪瘟 pF317L蛋白 杆状病毒 免疫原性 磷酸化 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2020,（7）
• 所属期刊栏目: 兽医科学
• 页码范围: 66-69,76
• 页数: 5页
• 分类号: S852.65|Q78
• 语种: 中文
• DOI: 10.13881/j.cnki.hljxmsy.2019.12.0263

摘要

为了获得可纯化的非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV) pF317L蛋白并对其进行鉴定,试验采用基因合成的方法获得密码子优化的F317L基因,亚克隆至pFastBac Ⅰ载体中,构建重组杆状病毒中间转移载体,导入DH10Bac感受态细胞中,得到重组穿梭质粒,再转染sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒;将重组病毒感染sf9细胞,用SDS-PAGE和Western-blot鉴定重组蛋白的表达;镍柱亲和层析纯化获得目的蛋白;对纯化的蛋白质进行磷酸化检测.结果 表明:成功构建了重组转座质粒pFastBac-F317L,导入DH 10Bac感受态细胞得到重组穿梭质粒rBacmid-F317L,再转染sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒AcNPV-F317L,重组病毒感染sf9细胞后获得重组蛋白,大小为36 ku,能够与His标签单克隆抗体和ASFV阳性血清发生特异性反应,有磷酸化修饰.说明获得了纯化的ASFVpF317L蛋白,且该蛋白质具有生物活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	颜世君		3	3	1.0	1.0
3	王同燕		6	0	0.0	0.0
5	李向东		13	4	2.0	2.0
7	田克恭		27	27	2.0	5.0
9	李胜强		2	0	0.0	0.0
13	宋欢欢		4	0	0.0	0.0
15	白露露		1	0	0.0	0.0