IKBKB基因c.1183T＞C点突变小鼠的建立及基本表型分析

• 作者: 冯苠璇 周丽娜 秦涛 贾彦军 赵晓东
• 来源期刊: 中国细胞生物学学报
• 关键词: CRISPR/Cas9 IKBKB基因 小鼠模型 蛋白预测 淋巴细胞
• 年，卷（期）: 2020,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 469-477
• 页数: 9页
• 语种: 中文
• DOI: 10.11844/cjcb.2020.03.0011

摘要

该研究主要为探究IKBKB基因c.1183T＞C位点突变对人免疫器官淋巴细胞的影响.采用CRISPR/Cas9技术构建相应点突变模式小鼠,并提取小鼠(C57BL/6J)基因组DNA进行PCR及一代测序、鉴定及扩繁,使用密度梯度离心法提取小鼠脾脏及胸腺淋巴细胞,采用Real-time PCR及Western blot检测淋巴细胞中IKKs家族各亚基(IKKα、IⅪβ和IKKγ) mRNA及蛋白的表达,并使用分子运行模式(molecular operating environment,MOE)软件分析蛋白PDB结构及建立3D模型.小鼠基因测序结果表明成功构建点突变稳定基因型小鼠;与野生型小鼠相比,纯合突变小鼠IKBKBmRNA表达无明显变化,而IKKβ蛋白表达明显降低;蛋白结构分析结果提示,突变后的IKKβ蛋白空间构型明显改变.研究初步表明,IKBKB Y397H突变导致小鼠脾脏及胸腺的淋巴细胞中IKKβ蛋白明显下降,可能是由于突变导致蛋白结构发生改变而使其稳定性降低,这为进一步探究该位点突变对免疫细胞稳态调节及其致病机制提供了新思路及实验基础.