棉花GhPDP基因原核表达条件的优化

• 作者: 兰艳平 刘东 张丽 渠云芳 赵岩 黄晋玲
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 农学
• 关键词: 棉花 GhPDP基因 原核表达 条件优化
• 年，卷（期）: 2020,（5）
• 所属期刊栏目: 作物遗传育种·种质资源·生物技术
• 页码范围: 55-61
• 页数: 7页
• 分类号: S562.03
• 语种: 中文
• DOI: 10.7668/hbnxb.20191119

摘要

丙酮酸脱氢酶磷酸酶GhPDP与棉花雄性不育能量调控方面密切相关.为了得到大量有活性的GhPDP蛋白,试验将对目的蛋白原核表达条件进行优化.将编码GhPDP基因的cDNA序列插入pET-22b中构建重组表达载体pET-22b-GhPDP,转化到大肠杆菌Transetta(DE3)进行IPTG诱导表达,通过单因素试验和正交试验对诱导温度、诱导时间、IPTG终浓度和OD600进行优化,利用SDS-PAGE和GeneTools凝胶分析软件分析目的蛋白的表达量,以摸索目的蛋白可溶性表达的最佳条件.结果显示,成功构建重组表达载体pET-22b-GhPDP;目的蛋白在Transetta(DE3)菌株中表达,表达形式多为包涵体;单因素试验结果表明,在诱导温度20℃、诱导时间为5 h、IPTG终浓度0.10 mmol/L和菌体密度OD600为0.8条件下,目的蛋白可溶性表达量最高;通过正交分析得出,影响目的蛋白可溶性表达的因素强度由高到低依次为诱导温度、IPTG终浓度、诱导时间及菌体密度OD600.综合单因素试验和正交试验结果,确定诱导的最佳条件:菌体密度OD600为0.8、诱导温度为20℃、诱导时间为5 h、IPTG终浓度为0.10 mmol/L.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄晋玲		27	149	8.0	11.0
2	张丽		60	141	7.0	10.0
3	渠云芳		32	211	7.0	14.0
4	兰艳平		2	0	0.0	0.0
5	刘东		4	8	1.0	2.0
6	赵岩		7	0	0.0	0.0