非洲猪瘟病毒CP204L基因的生物信息学分析、载体构建及蛋白表达

• 作者: 徐一鸣 杨莲花 武悦 王楠 王泽宇 蔡维北 许会会 鲁中爽
• 来源期刊: 广东农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 非洲猪瘟病毒(ASFV) 生物信息学 表达载体 诱导表达
• 年，卷（期）: 2020,（7）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医·水产养殖
• 页码范围: 128-136
• 页数: 9页
• 分类号: Q786|S828
• 字数: 5267字
• 语种: 中文
• DOI: 10.16768/j.issn.1004-874X.2020.07.016

摘要

[目的]非洲猪瘟病(African swine fever,ASF)是一种由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)导致的,能引起猪高度致死的急性传染病.采用生物学手段制备检测试剂能更快、更有效地监测疫情,对ASF疫情的防控尤为重要.[方法]根据ASFV的CP204L基因CDS区序列设计特异性引物并进行PCR扩增,将目的基因片段与p EASY-T5连接构建克隆载体,利用生物信息学软件对蛋白进行生物信息学分析,用T4连接酶构建重组载体pET-32a(+)-CP204L,将成功构建的重组表达载体质粒转入感受态Rosetta(DE3)中,用1 mmol/L IPTG、37℃诱导表达8 h后进行SDS-PAGE电泳鉴定蛋白表达.[结果]生物信息学分析结果表明,P30蛋白是一种主要由无规卷曲α螺旋和β折叠组成的亲水和稳定蛋白,PCR扩增及测序比对结果证明成功构建了重组表达载体,SDS-PAGE电泳验证了在24.3 ku处有潜在的P30蛋白表达.[结论]通过生物信息学软件在分子层面分析了P30蛋白的理化性质及蛋白结构,P30蛋白的表达为制备ASFV血清学诊断试剂及诊断技术奠定了基础.