CRISPR/Cas9技术构建Vegf-b敲除斑马鱼模型和心血管发育异常的初探

• 作者: 冯启荣 吴文富 宋来思 谭文 赵海山
• 来源期刊: 广东药科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: Vegf-b CRISPR/Cas9 斑马鱼 基因敲除
• 年，卷（期）: 2020,（2）
• 所属期刊栏目: 药理学
• 页码范围: 225-230
• 页数: 6页
• 分类号: R-332
• 语种: 中文
• DOI: 10.16809/j.cnki.2096-3653.2019122301

摘要

目的 使用CRISPR/Cas9技术构建血管内皮生长因子b(Vascular endothelial growth factor b,Vegf-b)敲除斑马鱼模型.方法 设计CRISPR/Cas9位点,体外转录单链向导RNA(single guide RNA,sgRNA)和Cas9 RNA,通过斑马鱼受精卵显微注射,评价sgRNA效率.对子代斑马鱼进行基因测序并筛选,最后获得基因敲除的纯合子斑马鱼Vegf-b-/-.结果 针对1个基因位点设计并构建了2个sgRNA,选择效率最高的sgRNA1进行斑马鱼受精卵显微注射,获得嵌合体F0代胚胎,筛选出稳定遗传的founder.并进一步通过三代筛选鉴定获得可稳定遗传的Vegf-b敲除的斑马鱼系,通过荧光显微镜观察发现其血管发育和心脏形态异常.结论 通过CRISPR/Cas9技术,可以稳定可靠的构建Vegf-b基因敲除斑马鱼,并证明Vegf-b影响斑马鱼体节间血管的发育和心脏功能,为后续Vegf-b功能研究奠定了重要的基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	宋来思		1	0	0.0	0.0
2	赵海山		1	0	0.0	0.0
3	吴文富		1	0	0.0	0.0
4	冯启荣		1	0	0.0	0.0
5	谭文		1	0	0.0	0.0