大鼠β-arrestin2基因过表达慢病毒载体的构建与鉴定

• 作者: 卢力 卢帅 周恒 周艳丽 王继春 谢菁 陈思思
• 来源期刊: 贵州医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 质粒 慢病毒属 β-抑制蛋白2基因 基因过表达 聚合酶链式反应
• 年，卷（期）: 2020,（9）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1025-1030
• 页数: 6页
• 分类号: R543.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.19367/j.cnki.2096-8388.2020.09.007

摘要

目的:构建大鼠 β-抑制蛋白2(β-arrestin2)基因过表达慢病毒载体并鉴定.方法:取Pubmed数据库中大鼠 β-arrestin2的cDNA序列合成引物,采用聚合酶链式反应(PCR)扩增获取大鼠 β-arrestin2基因;采用琼脂糖凝胶电泳鉴定,回收PCR产物并对其进行纯化;取限制性内切酶BamHI/AgeI酶切载体质粒和纯化后的PCR产物,将二者实施连接后转化感受态细胞,挑取菌落进行PCR鉴定,并对PCR鉴定阳性的克隆进行测序和比对抽提质粒;将 β-arrestin2重组质粒与慢病毒辅助包装质粒共转染至293T细胞,获取病毒粗提液并进行扩增、纯化,稀释法测定病毒滴度、荧光显微镜下观察慢病毒感染效率.结果:PCR扩增所得产物大小为1274 bp,与Pubmed数据库中该基因片段大小一致;阳性转化子的PCR产物大小为728 bp,对比Pubmed数据库中大鼠Arrb2基因序列,上下游引物基因序列大小与转化子PCR产物结果一致;慢病毒包装完成后病毒滴度为5×1011 TU/L,病毒感染效率较高.结论:成功构建了携带大鼠 β-arrestin2基因的慢病毒载体,目的基因在转染细胞内能稳定高表达.