A型塞内卡病毒VP2蛋白阻断ELISA检测方法的建立

• 作者: 史雪坤 李蕊 汪恩强 王慧青 申珊 秦建华 苗天姿 袁万哲 许立阳 马玉忠
• 来源期刊: 黑龙江畜牧兽医（下半月）
• 学科: 农学
• 关键词: 猪 A型塞内卡病毒 VP2蛋白 单克隆抗体 阻断ELISA 特异性
• 年，卷（期）: 2020,（7）
• 所属期刊栏目: 兽医科学
• 页码范围: 87-90
• 页数: 4页
• 分类号: S852.5+3|S852.65
• 语种: 中文
• DOI: 10.13881/j.cnki.hljxmsy.2019.09.0090

摘要

为了建立一种检测A型塞内卡病毒(SVA) VP2蛋白抗体的阻断ELISA方法,试验用SVAVP2蛋白作为抗原包被酶标板,采用棋盘法确定最佳蛋白包被浓度和单克隆抗体最佳稀释倍数.同时对阻断ELISA的其他条件(封闭液、血清稀释度、底物反应条件)进行优化,对方法的特异性和重复性进行考察.结果 表明:VP2蛋白最佳包被浓度为0.5 μg/mL;最佳封闭液为2％BSA,每孔200 μL,37℃封闭1h;待检血清最佳稀释度为1∶1,在37 ℃条件下作用1h;单克隆抗体最佳稀释度为1∶40 000,在37℃条件下作用1h;底物最佳反应条件为室温避光10 min.特异性试验结果显示,SVA阳性血清与猪伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综征病毒、猪瘟病毒、猪口蹄疫病毒、猪流行性腹泻病毒阳性血清均无交叉反应.批间、批内重复性试验结果的变异系数均小于10％.对200份猪血清样本进行荧光抗体中和试验和阻断ELISA方法检测,符合率为96.0％.说明该ELISA方法具有良好的特异性和重复性,可用于塞内卡病毒血清抗体检测和流行病学调查.