A型塞内卡病毒VP1结构蛋白在昆虫杆状病毒中的表达与鉴定

• 作者: 乌吉斯古楞 关平原 刘建奇 宋庆庆 巨敏莹 张斌 张杰 韩宇
• 来源期刊: 中国动物检疫
• 学科: 农学
• 关键词: 猪塞内卡病毒 VP1蛋白 昆虫杆状病毒表达系统
• 年，卷（期）: 2020,（12）
• 所属期刊栏目: 技术支撑
• 页码范围: 114-119
• 页数: 6页
• 分类号: S855.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2020.12.022

摘要

目前在昆虫杆状病毒表达系统(baculovirus expression vector system,BEVS)中表达A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)结构蛋白VP1尚未见报道.本研究将VP1基因通过限制性酶切位点插入杆状病毒载体pFastBac I,然后将鉴定正确的重组载体转化至DH10Bac感受态细胞,经蓝白斑筛选,对鉴定正确的菌落提取质粒.将质粒转染Sf9昆虫细胞,待有明显细胞病变后收获重组杆状病毒rBac-I-VP1,并进行病毒滴度测定.随后通过蛋白免疫印记(Western Blot)和间接免疫荧光(IFA)鉴定VP1蛋白表达情况.结果显示,重组杆状病毒rBac-I-VP1滴度为6.8×105 pfu/mL;Western Blot可检测到相对分子质量约27 kDa的表达产物,且其能够被SVA兔阳性多克隆血清识别;IFA试验显示,VP1蛋白能够在Sf9细胞内表达.结果表明,本研究利用BEVS表达的SVA VP1蛋白具有良好的免疫反应性,为其后期功能研究及SVA诊断试剂研制提供了技术基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	关平原		58	314	10.0	15.0
2	张杰		12	23	3.0	4.0
3	张斌		4	5	1.0	2.0
4	乌吉斯古楞		10	52	4.0	7.0
5	刘建奇		3	1	1.0	1.0
6	韩宇		2	0	0.0	0.0
7	巨敏莹		2	0	0.0	0.0
8	宋庆庆		2	0	0.0	0.0