CRISPR/Cas9介导Smad3基因敲除对人腹膜间皮细胞增殖和凋亡的影响

• 作者: 廖蕴华 李福记 林鹏 梁靖梅
• 来源期刊: 广西医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: Smad3基因 CRISPR/Cas9 人腹膜间皮细胞
• 年，卷（期）: 2020,（8）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1398-1403
• 页数: 6页
• 分类号: R692.5
• 语种: 中文
• DOI: 10.16190/j.cnki.45-1211/r.2020.08.002

摘要

目的:以CRISPR/Cas9基因编辑技术,构建Smad3基因敲除的人腹膜间皮细胞(HPMC),研究Smad3在HPMC增殖和凋亡中的调控机制.方法:利用CRISPR Design软件设计gRNA,比对后合成,构建Smad3 gRNA-PX459质粒,用Lipofectamine 3000转染细胞,嘌呤霉素筛选后用有限稀释法获得单克隆细胞株,提取DNA进行PCR扩增后测序,同时提取总蛋白,采用蛋白免疫印迹(Western blotting)检测蛋白表达情况;CCK8法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡率,West-ern blotting检测凋亡相关蛋白表达.结果:成功构建Smad3稳定敲除的HPMC.Smad3基因敲除后,细胞增殖率无明显变化(P＞0.05),而凋亡率从(7.92±0.26％)上升至(11.70±0.56％),促凋亡相关蛋白Bax表达量从(0.70±0.05)上调至(1.25±0.11)(P＜0.05).结论:Smad3基因在HPMC的凋亡中具有重要的调控作用.