5种分子伴侣对水貂阿留申病毒核衣壳蛋白VP2部分基因可溶性表达的影响

• 作者: 吕甜甜 张蕾 朱言柱 柏玲 潘悦
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 水貂阿留申病毒 伴侣蛋白 可溶性表达
• 年，卷（期）: 2020,（9）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 1699-1706
• 页数: 8页
• 分类号: S852.65
• 语种: 中文
• DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2020.09.06

摘要

为实现水貂阿留申病毒(Aleutian disease virus,ADV)部分VP2基因的可溶性表达,进一步探究目的蛋白的反应原性,本研究利用基因工程技术克隆ADV衣壳蛋白VP2部分基因,并亚克隆至原棱表达栽体pET30a(+)中,获得重组表达栽体pET-30a-M,经诱导表达后,SDS-PAGE确定蛋白表达形式,尝试降低诱导温度及诱导剂浓度来增加可溶性蛋白表达量,但效果不显著;随后,为增加可溶性表达,尝试将pET-30a-M分别与pG-KJE8、pGro7、pKJE7、pG-Tf2和pTf16 5种伴侣蛋白共表达.通过SDS-PAGE筛选有效的伴侣蛋白,将伴侣蛋白pG-KJE8、pGro7、pKJE7、pG-Tf2和pTf16 5种质粒分别转入感受态细胞BL21 (DE3),将pET-30a-M质粒分别转入舍各种伴侣蛋白的感受态细胞.各种共表达菌株经双抗性筛选,诱导剂诱导表达,SDS-PAGE分析蛋白的表达情况.并从诱导温度和伴侣蛋白诱导剂L-Arabinose剂量两个方面筛选最佳表达条件.SDS-PAGE和Western blot分析结果表明重组表达载体pET-30a-M诱导表达后,蛋白主要以包涵体形式存在,与伴侣蛋白pKJE7共表达后,上清中的可溶性目的蛋白的含量增加,相对分子质量约为70 000,且具有反应原性;与pG-KJE8、pGro7、pG-Tf2和pTf16伴侣蛋白共表达,未见可溶性蛋白增加.随着温度的降低,30℃与25℃比37℃上清中的可溶性蛋白表达量有所增加,诱导剂浓度对蛋白表达量影响不大.pKJE7伴侣分子可以促进pET-30a-M可溶性表达,且表达量不受L-Arabinose诱导剂量影响,随着温度降低,可溶性蛋白表达量有所增加,表达的蛋白具有反应原性,本研究为进一步探究该蛋白的生物学功能奠定基础.