CRISPR/Cas9基因编辑技术构建5型磷酸二酯酶基因敲除鼠的模型及表型分析

• 作者: 公威 李思懿 聂绍平 马友才
• 来源期刊: 中国医药
• 学科: 医学
• 关键词: CRISPR/Cas9基因编辑 5型磷酸二酯酶 基因敲除 表型
• 年，卷（期）: 2020,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1121-1125
• 页数: 5页
• 分类号: R394
• 字数: 5506字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn.1673-4777.2020.07.035

摘要

目的 利用CRISPR/Cas9基因编辑技术建立5型磷酸二酯酶(PDE5)基因敲除小鼠模型并分析小鼠表型,初步探讨PDE5基因敲除对小鼠各项生命指标的影响.方法 利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,通过胚胎显微注射移植法引导Cas9裂解酶裂解PDE5基因,删除第2外显子589个核苷酸构建敲除小鼠模型,鼠尾DNA做聚合酶链反应和测序鉴定基因型,将阳性PDF5基因敲除鼠和C57BL/6J背景鼠回交,再次通过鼠尾DNA做聚合酶链反应和测序鉴定基因型验证阳性PDE5敲除鼠并繁育.选择8只雄性C57BL/6J野生型小鼠及8只雄性PDE5基因敲除纯合子小鼠,通过观察2组小鼠生长发育情况,利用病理切片和超声心动图检测心脏结构和功能,检测全血细胞计数和生化指标,进行开场实验,分析PDE5基因敲除小鼠的表型.结果 PDE5基因敲除小鼠已成功繁育鉴定,子代基因敲除纯合型小鼠无胚胎期致死现象且生长正常,与野生型小鼠相比外观、生长发育未见明显差异.PDE5基因敲除对小鼠的心脏形态及功能无明显影响;但基因敲除鼠的血小板计数、中性粒细胞计数及百分比均明显低于野生鼠[(894±74)×109/L比(1 052±150)×109/L、(1.3±0.4)×109/L比(1.8 ±0.4)×109/L、(14±3)％比(18±4)％](均P＜0.05).同时,基因敲除鼠开场实验中0～5 min和5～ 10 min的全场运动距离和全场运动速度明显高于野生鼠[全场运动距离:(18 345 ±5 480) mm比(12 057±3 154)mm、(15 249±3 581)mm比(10 190±1 869)mm;全场运动速度:(61±18)mm/s比(40±11)mm/s、(51±12) mm/s比(34±6)mm/s](均P＜0.05).结论 经基因型鉴定已成功获得PDE5基因敲除小鼠.表型分析提示,PDE5基因敲除鼠较野生鼠而言,血小板和中性粒细胞水平降低,活动力明显增强,但PDE5基因敲除对小鼠心脏形态及功能未见明显影响.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	聂绍平	首都医科大学附属北京安贞医院急诊危重症中心北京市心肺血管疾病研究所	137	677	13.0	17.0
2	公威	首都医科大学附属北京安贞医院急诊危重症中心北京市心肺血管疾病研究所	8	11	3.0	3.0
3	马友才	首都医科大学附属北京安贞医院急诊危重症中心北京市心肺血管疾病研究所	2	0	0.0	0.0
4	李思懿	首都医科大学附属北京安贞医院急诊危重症中心北京市心肺血管疾病研究所	1	0	0.0	0.0