重组人Ⅲ型胶原蛋白的表达纯化及性能研究

• 作者: 刘鑫 李华 齐磊 宋富 徐兰举
• 来源期刊: 国际生物医学工程杂志
• 关键词: 重组人Ⅲ型胶原蛋白 大肠杆菌 高密度发酵 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2021,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 18-22,33
• 页数: 6页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.cn121382-20201005-00103

摘要

目的:表达和纯化重组人Ⅲ型胶原蛋白（rhCol），并评价其性能。方法:构建重组基因工程菌pET30a（+）-1880/pACYCDuet-hy726/BL21（DE3），稳定共表达rhCol和脯氨酰羟化酶。通过大肠杆菌高密度发酵与盐析和柱层析蛋白纯化技术制备并纯化rhCol。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定rhCol的纯度，全自动蛋白质多肽测序仪测定rhCol的N端氨基酸序列，紫外分光光度法测定rhCol中的羟脯氨酸含量，噻唑蓝法评价rhCol的细胞相容性。结果:高密度发酵最终菌体湿重约200 g/L，表达量约3 g/L，通过亲和层析获得的rhCol的纯度大于95%。rhCol的羟脯氨酸含量为11.44%，其水溶性及细胞相容性良好。结论:本研究制备的rhCol可作为一种优良的生物材料广泛用于皮肤护理及生物医药等领域。