编码大鼠ENPP1蛋白的cDNA克隆及重组腺相关病毒构建

• 作者: 狄枫 吴秀娟 沈水娟 郭波尧
• 来源期刊: 温州医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 腺相关病毒 外核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶1 钙化 克隆 大鼠
• 年，卷（期）: 2021,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 13-18
• 页数: 6页
• 分类号: R543.5
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-9400.2021.01.003

摘要

目的:克隆编码大鼠外核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶1(ENPP1)的全长cDNA片段,构建ENPP1重组腺相关病毒载体(AAV-ENPP1).方法:以大鼠血管平滑肌细胞mRNA为模板,通过RT-PCR扩增获得大鼠ENPP1基因大片段并克隆至pCDH载体中,经过EcoR I/Xho I酶切、连接、转化将该片段克隆至腺相关病毒载体pAAV-MCS中,酶切及DNA测序对阳性克隆进行鉴定.重组AAV-ENPP1经包装后转染目的血管平滑肌细胞,Western blot检测目的蛋白ENPP1的表达.结果:RT-PCR成功克隆出2721 bp的大鼠ENPP1基因大片段,并最终获得测序正确的pAAV/ENPP1克隆,Western blot检测显示目的蛋白ENPP1的表达升高.结论:成功构建大鼠ENPP1重组腺相关病毒载体.