GLP-1衍生物多克隆抗体的制备及应用

• 作者: 桑延霞 蓝叶芷 陈曼纯
• 来源期刊: 生物技术
• 关键词: 胰高血糖素样肽-1 多克隆抗体 ELISA 免疫沉淀
• 年，卷（期）: 2021,（2）
• 所属期刊栏目: 开发与应用|Development and Application
• 页码范围: 171-175,128
• 页数: 6页
• 分类号: Q786
• 语种: 中文
• DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2021.02.0026

摘要

[目的]制备抗LmGLP-1的高特异性多克隆抗体,为LmGLP-1的活性和应用研究提供基础.[方法]以高纯度LmGLP-1为免疫原,对SD大鼠进行皮下注射免疫,获得抗血清,通过Western Blotting鉴定其特异性,采用ELISA测定多抗效价,建立间接ELISA测定LmGLP-1的工作曲线,并验证多抗在免疫沉淀(IP)和间接ELISA测定大鼠血样中LmGLP-1抗原的应用.[结果]获得的抗血清能特异性识别利用原核表达系统制备的LmGLP-1抗原,效价高达1∶16 000,建立的间接非竞争ELISA工作曲线在0.50～80 ng/mL范围内线性良好,检出限为0.25 ng/mL,能有效测定复杂血样中LmGLP-1的浓度.免疫沉淀反应显示,抗血清能识别大鼠体内的外源性LmGLP-1,也可识别低水平的内源性GLP-1.[结论]所制备的LmGLP-1抗血清具有良好的反应性和特异性,为后续LmGLP-1的机制研究和药效、药代动力学的开展提供了基础.