H2A.X和NPM1哺乳动物双杂交表达载体的构建及其在MCF-7细胞中的表达

• 作者: 高秀丽 段文博 王婧 王涛 任珊
• 来源期刊: 中国比较医学杂志
• 关键词: H2A.X NPM1 哺乳动物双杂交表达载体 乳腺癌
• 年，卷（期）: 2021,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 24-29
• 页数: 6页
• 分类号: R-33
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7856.2021.02.004

摘要

目的 构建人源组蛋白H2A.X和核仁磷蛋白NPM1哺乳动物双杂交表达载体,并实现其在乳腺癌MCF-7细胞中的表达.方法 PCR扩增H2A.X及NPM1基因表达序列,TA克隆后连接至pBIND和PACT载体,双酶切和测序验证后转染MCF-7细胞,RT-PCR检测表达效果.结果 PCR结果产生与H2A.X和NPM1编码序列大小一致DNA片段;目的片段的TA,pBIND,PACT克隆及双酶切验证后均产生预期大小DNA片段;测序结果表明所构建的H2A.X-pBIND和NPM1-PACT产生的DNA序列同H2A.X和NPM1编码序列完全匹配;转染H2A.X-pBIND和NPM1-PACT表达载体的细胞相应mRNA表达水平明显增加.结论 成功构建H2A.X和NPM1哺乳动物双杂交表达载体并实现其在乳腺癌MCF-7细胞中的表达,为研究乳腺癌中二者的相互作用及功能提供实验基础.