喜树丛枝植原体的分子鉴定及TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法的建立

• 作者: 王柱华 王文鹏 袁恩平 苏帆 毛清源 万琼莲 蔡红
• 来源期刊: 植物病理学报
• 关键词: 喜树丛枝病 植原体 TaqMan探针 实时荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2021,（3）
• 所属期刊栏目: 实验方法|EXPERIMENTAL METHOD
• 页码范围: 429-440
• 页数: 12页
• 分类号: S432.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.13926/j.cnki.apps.000707

摘要

为确定在云南文山地区喜树上发生的疑似丛枝病的病原种类及快速检测喜树丛枝病,本研究利用植原体16S rDNA基因通用引物P1/P7和R16F2n/R16R2对感病喜树总DNA进行常规PCR和巢式PCR扩增、克隆和测序,通过系统进化分析,明确了喜树丛枝植原体属于16SrXXXII组.然后根据喜树丛枝病植原体16S rDNA基因保守区域设计并合成特异性引物和TaqMan探针,制备了喜树丛枝病植原体标准质粒,确定了最优引物浓度和最佳探针浓度,制作的标准曲线有极好的线性关系,决定系数(R2)达到0.999,建立的实时荧光定量PCR检测方法能够特异性地检测喜树丛枝植原体.本研究首次明确了喜树丛枝植原体的分类地位,优化和建立了喜树丛枝植原体TaqMan探针qPCR检测方法,为快速检测喜树丛枝病植原体提供参考.