花烟草植物防御素1蛋白在毕赤酵母中的表达及纯化

• 作者: 杨德奕 赵懿琛 龚伟伟 李昆鹏
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 关键词: 植物防御素1 毕赤酵母 花烟草
• 年，卷（期）: 2021,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 517-521
• 页数: 5页
• 分类号: Q512
• 语种: 中文

摘要

目的 在毕赤酵母中表达花烟草植物防御素1 (Nicotiala alata defensin 1,NaD1)蛋白,并进行纯化.方法 重组表达质粒pPIC9K-NaD1经Sac Ⅰ内切酶线性化后,电转化至感受态毕赤酵母GS115,采用甲醇进行小量诱导表达,选择表达量相对较高的单菌落进行扩大培养,获得大量重组蛋白NaD1,经Ni-NTA亲和层析纯化后,对纯化产物进行15％ SDS-PAGE分析及Western blot检测.结果 纯化产物相对分子质量约20000,可与小鼠抗NaD1单克隆抗体发生特异性结合,于相对分子质量约20000处可见特异性结合条带,蛋白纯度达85％.结论 在毕赤酵母中成功表达了NaD1蛋白,纯化后纯度较高,本实验为后续NaD1蛋白杀伤真菌作用机制的研究奠定了基础.