鹦鹉博尔纳病毒4型SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立

• 作者: 黎金荣 陈武 翟俊琼 关蕴 李婉萍 焦培荣 单芬
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 关键词: 鹦鹉博尔纳病毒 荧光定量PCR 快速检测
• 年，卷（期）: 2021,（1）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 17-23
• 页数: 7页
• 分类号: S852.659.5
• 语种: 中文
• DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2021.0005

摘要

为建立鹦鹉博尔纳病毒4型SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法,通过扩增病毒M基因并与pMD19-T载体连接,构建重组质粒作为标准品,根据M基因序列设计特异性定量引物,进行了荧光定量PCR的敏感性、特异性、重复性试验.结果显示,荧光定量PCR比普通PCR检测灵敏度高100倍,可检出最低拷贝数为6.7×102copies/μL的标准品,而普通PCR只能检测到最低拷贝数为6.7×104 copies/μL的标准品;用荧光定量PCR方法检测H5N6、H7N9、H9N2 AIV,NDV,IBV时均未见扩增;批内及批间重复变异系数均小于1％;对8只鹦鹉脑组织样品进行检测,荧光定量PCR检出阳性样品6份,普通PCR检出阳性样品4份,检出率两者相差25％.采用本方法对64份临床采集的鹦鹉粪便样本进行检测,结果筛选出阳性样品1份.以上结果表明,本研究建立的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法具有良好的灵敏性、特异性和重复性,可用于鹦鹉博尔纳病毒4型的检测.