DPEP1基因过表达BT549细胞株的建立和鉴定

• 作者: 郑美玲 魏春莉 刘晓燕 傅俊江
• 来源期刊: 西南医科大学学报
• 关键词: 二肽酶1 载体构建 肿瘤 细胞系
• 年，卷（期）: 2021,（4）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 301-306
• 页数: 6页
• 分类号: R34
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2096-3351.2021.04.001

摘要

目的 探讨二肽酶1(dehydropeptidase-1,DPEP1)基因表达载体的构建及DPEP1蛋白在肿瘤细胞中的过表达情况及其影响.方法 将DPEP1全长基因PCR扩增,EcoR V和Nhe I双酶切后克隆入带有同样双酶切pcDNA5/FRT/TO表达载体,并获取pcDNA5/FRT/T0/DPEP1,筛选阳性克隆,Sanger测序确证.扩增pcDNA5/FRT/T0/DPEP1质粒并将其转染入BT549细胞系,获得DPEP1过表达,借助Western blot、CCK-8等实验技术分析其表达及影响作用.结果 成功构建了DPEP1的过表达载体,转染肿瘤细胞株,并获得DPEP1过表达蛋白,目的蛋白表达明显升高,其过表达的条带灰度约为阴性对照的20倍.结论 研究的成功实施为将来阐明DPEP1基因在肿瘤中的作用及机制奠定了实验基础.