重组人唾液淀粉酶A的制备及活性鉴定

• 作者: 刘洁 金科华
• 来源期刊: 湖北科技学院学报（医学版）
• 关键词: 唾液淀粉酶A pET-28a质粒 淀粉
• 年，卷（期）: 2021,（4）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 292-294,封3
• 页数: 4页
• 分类号: Q787
• 语种: 中文
• DOI: 10.16751/j.cnki.2095-4646.2021.04.0292

摘要

目的 利用基因工程制备重组人唾液淀粉酶A(rSAA),用其替代唾液中的SAA水解淀粉.方法 设计一对带酶切位点的引物,PCR扩增SAA cDNA全长,将pET-28a质粒和PCR产物双酶切、连接.连接产物热激法转化大肠杆菌DH5α,于含卡那霉素的LB平板筛选抗性菌落,培养抗性菌落,抽提质粒,进行酶切和测序鉴定.将重组质粒(记为pS1)转化大肠杆菌BL21(DE3),用含卡那霉素的LB平板筛选抗性菌落(记为BL-pS1),培养BL-pS1,ITPG诱导rSAA表达.收集菌体,重悬于pH6.8的磷酸缓冲液,超声裂解,离心取上清,测试其水解淀粉的活性.结果 构建了 SAA cDNA的原核表达载体pS1,rSAA在宿主菌BL21(DE3)中获得可溶性表达,rSAA能高效水解淀粉.结论 用rSAA取代唾液中SAA水解淀粉操作安全、取用方便、利于环保.