小鼠Cdc14A荧光表达载体的构建及鉴定

• 作者: 侯力 孟峻
• 来源期刊: 山西医科大学学报
• 关键词: Cdc14A 荧光表达载体 HEK293细胞 聚合酶链式反应
• 年，卷（期）: 2021,（7）
• 所属期刊栏目: 基础医学|Basic Medicine
• 页码范围: 857-861
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 语种: 中文
• DOI: 10.13753/j.issn.1007-6611.2021.07.009

摘要

目的 构建含有小鼠Cdc14A基因的荧光表达载体pcDNA3.1-MYC-Cdc14A-mcherry,并观察和验证其在真核细胞中的表达.方法 通过聚合酶链式反应将实验室保存的真核表达质粒pcDNA3.1-MYC-Cdc14A中目的基因Cdc14A与mcher-ry融合并扩增出来,然后定向克隆至pcDNA3.1-MYC-C质粒中,经限制性内切酶消化和测序证实后,通过脂质体法转染HEK293细胞,Western blotting法检测目的基因的蛋白表达情况.结果 测序结果和之前预期结果相符,证实pcDNA3.1-MYC-Cdc14A-mcherry荧光表达载体构建成功,Western blotting检测转染pcDNA3.1-MYC-Cdc14A-mcherry的细胞出现清晰的阳性反应条带,说明目的片段成功表达.结论 pcDNA3.1-MYC-Cdc14A-mcherry荧光表达载体构建成功.