双荧光素酶报告系统鉴定miRNA-3133对200 kD黏着斑激酶家族相互作用蛋白基因的靶向调控作用

• 作者: 金巧智 叶文蔚 陶宝鸿 张朝晖 李志海 蔡志毅
• 来源期刊: 中国卫生检验杂志
• 关键词: miRNA-3133 200kD黏着斑激酶家族相互作用蛋白 双荧光素酶报告系统
• 年，卷（期）: 2021,（4）
• 所属期刊栏目: 临床检验|Clinical Laboratory Test
• 页码范围: 469-472
• 页数: 4页
• 分类号: R737.9
• 语种: 中文

摘要

目的 通过构建分子量大小为200 kD的黏着斑激酶家族相互作用蛋白(FIP200)3'UTR双荧光素酶报告基因载体,研究FIP200与miR-3133的靶向关系.方法 采用生物信息学软件targetscan预测miR-3133与FIP200 3'端非翻译区(3'UTR)潜在的互补结合位点;利用PCR扩增FIP200基因3'UTR序列,并克隆到psicheck2载体中,构建FIP200野生型和突变型重组双荧光素酶报告基因载体;将野生型psicheck2-FIP200-wt 3'UTR或突变型psicheck2-FIP200-mut3'UTR双荧光素酶报告质粒分别与miRNA-3133 mimics或mimics-NC共转染CNE-1细胞;通过双荧光素酶报告系统检测各组荧光素酶活性,观察miRNA-3133对FIP200表达的影响.结果 生物信息学分析显示FIP200 3'UTR与miRNA-3133有潜在的结合位点,酶切和测序结果表明野生型和突变型双荧光素酶报告载体构建成功;双荧光素酶报告系统检测显示,miRNA-3133可抑制野生型FIP200载体的荧光素酶的表达(P ＜0.05),而对突变型载体的荧光素酶表达无影响(P ＞0.05).结论 成功构建FIP200基因3'UTR的双荧光素酶报告载体,miRNA-3133可以直接靶向调控FIP200基因的表达.