阪崎克罗诺杆菌RPA-LF检测方法的建立

• 作者: 张欣 王权 祁克宗 宋祥军 韩先干 蒋蔚
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 阪崎克罗诺杆菌 重组酶聚合酶扩增技术 侧流层析 快速检测
• 年，卷（期）: 2022,（2）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 168-176
• 页数: 9页
• 分类号: S852.6
• 语种: 中文
• DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2022.0030

摘要

以阪崎克罗诺杆菌特异性基因16SrRNA和外膜蛋白基因ompA为靶序列,设计适用于重组酶聚合酶扩增-侧流层析技术(RPA-LF)的引物和探针,并优化反应条件.结果表明,RPA反应可在25～45℃进行,10～20 min即可完成.优化条件后,RPA-LF总反应时间仅为20 min,包括RPA在39℃反应15 min,RPA反应产物在LF试纸条上反应5 min,即可用肉眼判断结果.该方法具有较高的灵敏度,最低检测限可以达到80 pg/反应,约为960 CFU/反应.与7种常见的食源性病原菌都没有交叉反应,表明该方法具有较好的特异性.此外,该方法能够同时识别6种阪崎克罗诺杆菌同属菌,表明该方法广谱性好.本研究中建立的针对阪崎克罗诺杆菌的RPA-LF检测方法,具有操作简便、快速敏感的优点,为该菌的现场快速检测打下了基础.