添加扩增内标的PCR方法快速检测食品中的阪崎克罗诺杆菌

• 作者: 仪淑敏 励建荣 张德福 张明 李春 汤轶伟 赵文竹 赵禹宗
• 来源期刊: 食品工业科技
• 学科: 工学
• 关键词: 阪崎克罗诺杆菌 扩增内标 假阴性 PCR检测
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 分析检测
• 页码范围: 49-52,58
• 分类号: TS201.6
• 语种: 中文
• DOI: 10.13386/j.issn1002-0306.2017.02.001

摘要

为了解决常规PCR方法检测阪崎克罗诺杆菌时因检测过程中环境和食品理化因素的影响而导致的假阴性结果的产生,本研究以细菌16S rRNA基因为扩增内标对照,以阪崎克罗诺杆菌特异性基因grxB为靶基因设计了一对特异性引物,并通过优化PCR反应条件,最终建立了一种添加扩增内标的阪崎克罗诺杆菌PCR检测方法,可以指示PCR过程中因存在DNA聚合酶抑制剂而导致的假阴性结果.通过对20种细菌进行PCR检测显示,该方法对阪崎克罗诺杆菌具有良好的特异性.灵敏度实验结果表明,该检测方法对阪崎克罗诺菌纯DNA模板的检测灵敏度为2.15×102 fg/μL,对阪崎克罗诺杆菌纯培养物的检测灵敏度为9.4×103 CFU/mL.对人工污染婴幼儿奶粉的检测结果显示,阪崎克罗诺杆菌接种量为0.94CFU/g的婴幼儿奶粉样品经过8h增菌培养后,即可检出.食品样品检测结果表明,不添加扩增内标的PCR检测方法中出现的假阴性结果可被本方法检出.该检测方法特异性强、灵敏度较高,能消除阪崎克罗诺杆菌常规PCR检测方法中可能出现的假阴性结果,适用于婴幼儿配方乳粉、乳制品等食品中阪崎克罗诺杆菌的快速检测.