茶树丝氨酸羧肽酶基因的克隆及表达分析

• 作者: 仇传慧 李伟伟 王云生 李明卓 骆洋 刘亚军 高丽萍 夏涛
• 学科: 农学
• 关键词: 茶树 丝氨酸羧肽酶 生物信息学分析 原核表达
• 年，卷（期）: 2022,（3）
• 页码范围: 202-211
• 页数: 9页
• 分类号: S571.1,Q946.5
• 语种: 中文

摘要

近年来，人们发现丝氨酸羧肽酶类蛋白（SCPL）参与植物次生代谢产物的酰基转移过程，即具有转酰基功能。本研究采用RT-PCR技术，获得了3个茶树丝氨酸羧肽酶基因的全长序列；生物信息学分析表明，3个CsSCPL蛋白均包含了1个底物结合位点、3个催化作用保守区和多个N-糖基化位点，及其Ser-Asp-His三联体催化中心等SCPL家族的典型特征；进化树分析表明，3个CsSCPL可能具有酰基转移酶的功能。实时荧光定量PCR结果表明3个基因在芽叶茎根中都有表达，其中，CsSCPL1和CsSCPL3在叶中的相对表达量明显高于茎和根，而CsSCPL2则在根中高表达。本研究成功地将CsSCPL重组到表达载体pET32a(+)上进行原核表达，并对诱导时间及诱导温度进行了优化；经IPTG诱导、SDS-PAGE检测，目标蛋白条带分子量为70kD，与预测大小相符。