牛支原体recA基因的克隆表达及重组recA的DNA重组酶活性分析

• 作者: 邵文华 付磊 荆婷婷 唐军林 孙延鸣 储岳峰
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 牛支原体 recA 原核表达 重组酶活性
• 年，卷（期）: 2022,（2）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 197-204
• 页数: 8页
• 分类号: S852.62
• 语种: 中文
• DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2022.0024

摘要

为了确定牛支原体recA是否也具有介导DNA重组的活性,从牛支原体PG45菌株基因组中克隆recA基因片段,构建至原核表达质粒pET-28a中,摸索表达条件,采用Ni-NTA树脂纯化而获得纯度较高的重组recA蛋白,并进行DNA重组酶活性试验.结果表明,重组蛋白以可溶性表达的最优条件为16℃、800 μmol/L IPTG、诱导30 h;而DNA重组酶活性试验结果表明,重组的牛支原体recA蛋白具有介导同源DNA重组酶活性.这将为构建牛支原体高效的定向遗传操作系统、探究re cA基因在牛支原体DNA损伤修复中的生物学功能和机制等奠定基础.