茄子U6启动子克隆及CRISPR/Cas9介导的基因编辑体系建立

• 作者: 王丹 王谧 刘军 周晓慧 刘松瑜 杨艳 庄勇
• 来源期刊: 园艺学报
• 学科: 农学
• 关键词: 茄子 U6启动子 CRISPR/Cas9 基因编辑
• 年，卷（期）: 2022,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文|Research Papers
• 页码范围: 791-800
• 页数: 10页
• 分类号: S641.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.16420/j.issn.0513-353x.2020-0265

摘要

利用拟南芥(Arabidopsis thaliana)U6RNA保守序列从茄子(Solanum melongena L.)基因组中鉴定到7个U6 RNA,并采用PCR技术成功克隆其启动子序列.GUS染色结果表明4个茄子U6启动子(SmU6-1P、SmU6-2P、SmU6-4P 和 SmU6-7P)具有转录活性.构建以 SmU6-1P/AtU6-P 驱动 SmWRKY4 sgRNA的CRISPR/Cas9基因编辑载体,通过农杆菌介导侵染茄子子叶外植体得到T0代植株.以T0代植株的DNA为模板扩增WRKY4片段并对产物测序,测序结果显示以SmU6-1P构建的CRISPR/Cas9载体能靶向编辑SmWRKY4,编辑率为27.0％.在基于AtU6-P的T0代植株中未检测到碱基突变,表明在茄子遗传转化中,茄子SmU6启动子编辑效率高于拟南芥AtU6启动子.