黄芩素介导FAK蛋白调控PI3K/Akt信号通路抑制胃癌HGC-27细胞增殖和迁移

• 作者: 乔丹 张晟郡 王时玉 姚光媛 蔡英兰 陈丽艳 朴英实
• 来源期刊: 中国实验方剂学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 黄芩素 胃癌 黏着斑激酶(FAK) 细胞增殖 磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路
• 年，卷（期）: 2022,（7）
• 所属期刊栏目: 药理
• 页码范围: 73-80
• 页数: 8页
• 分类号: R22|R242|R2-031|R285.5
• 语种: 中文
• DOI: 10.13422/j.cnki.syfjx.20220622

摘要

目的:研究黄芩素介导黏着斑激酶(FAK)调控磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路影响胃癌HGC-27细胞增殖和迁移的作用和可能的分子机制.方法:使用黄芩素(0、5、15、25、50 μmol·L-1)处理胃黏膜上皮GES-1细胞、胃癌HGC-27细胞48 h,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖活力;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测不同浓度黄芩素干预对FAK、上皮细胞-间质转化(EMT)及PI3K信号通路相关蛋白表达情况.利用慢病毒转染技术,构建稳定过表达FAK的胃癌HGC-27细胞,Western blot及绿色荧光蛋白(GFP)荧光检测FAK转染情况.细胞分为空载体组、黄芩素组、FAK过表达组和黄芩素处理FAK过表达组;MTT比色法检测细胞增殖活力;平板克隆形成实验观察克隆形成能力;Transwell迁移实验检测细胞迁移能力;Western blot检测EMT及PI3K信号通路相关蛋白表达情况.结果:与空白组比较,黄芩素(15、25、50μmol·L-1)组可明显抑制胃癌HGC-27细胞的增殖(P＜0.05,P＜0.01),并呈剂量依赖性,而对胃黏膜上皮GES-1细胞则未见明显抑制作用,黄芩素(5,15,25 μmoI·L-1)还可下调磷酸化(p)-FAK蛋白表达水平(P＜0.05,P＜0.01).慢病毒转染HGC-27细胞后,与空载体组比较,FAK过表达组中FAK蛋白的相对表达量明显升高,GFP荧光拍照显示空载体组和FAK过表达组中HGC-27细胞均带有绿色荧光.MTT比色法、平板克隆形成实验及Transwell迁移实验检测结果显示,与空载体组比较,黄芩素组对HGC-27细胞的增殖、克隆形成和迁移具有抑制作用,FAK过表达组促进胃癌细胞的增殖、克隆形成和迁移能力.与FAK过表达组比较,使用黄芩素处理FAK过表达组则会抑制FAK增强的细胞增殖和迁移能力(P＜0.05).与空白组比较,黄芩素(15、25 μmol·L-1)可明显上调胃癌HGC-27细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白表达,下调波形蛋白(Vimentin)、Snail、p-PI3K和p-Akt蛋白表达(P＜0.05,P＜0.01);与空载体组比较,FAK过表达组细胞E-cadherin蛋白表达下调,p-FAK、Vimentin和Snail蛋白表达上调,且p-FAK/FAK、p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt明显增加(P＜0.05),加入黄芩素处理后这一现象会被逆转.结论:黄芩素可介导FAK调控PI3K/Akt信号通路影响胃癌HGC-27细胞的增殖和迁移进程.