摘要:

建立LC-MS/MS检测猪尿中黄曲霉毒素M1的含量.猪尿样用超纯水稀释定容,充分漩涡振荡后经免疫亲和层析柱净化,甲醇洗脱,微孔滤膜过滤,经液相色谱分离,电喷雾离子源离子化,多反应离子监测(MRM)方式检测.外标法定量.采用0.1％甲酸:乙腈+甲醇溶液(1+1)为流动相,梯度洗脱.0.3 mL/min的流速.在0.01 μg/kg～0.50 μg/kg范围内具有良好的线性关系,最低检测限为0.01 μg/kg,回收率在70％～95％之间.此法操作简便、快速、灵敏、准确、样品处理简便易行,适用于测定猪尿中的黄曲霉毒素M1.

摘要:

本文对ELISA检测婴幼儿配方奶粉中的黄曲霉毒素M1含量方法进行改进,处理方法为(1+1)甲醇水提取再经三氯甲烷净化,提取效果比直接提取更佳.此方法的灵敏度为0.1μg/kg,加标回收率为90.0%～105.6%,相对标准偏差为6.57%,方法重复性良好,能有效消除假阳性.

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制备黄曲霉毒素M1污染样品的净化前处理免疫亲和柱.利用无血清培养基制备的高纯度抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体和溴化氰活化的Sepharose 4B进行偶联、装柱后通过IC-ELSIA对免疫亲和柱的性能评价确立了最佳反应条件.免疫亲和柱的有效柱容量为500ng,经添加回收试验测定的平均回收率为92.46%0,变异系数2.3%-7.2%.利用高纯度抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体和溴化氰活化的Sepharose 4B制备的免疫亲和柱可应用于乳制品等食品中黄曲霉毒素M1污染度测定的样品快速前处理.

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以喷涂了检测抗原黄曲霉毒素M1-BSA和驴抗鼠二抗形成检测线和质控线的硝酸纤维膜制备免疫层析试纸条,采用EDC/NHS法制备偶联了抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体的免疫磁珠。免疫磁珠与待检样本混合,经捕获、磁分离后,浓缩重悬液直接用免疫层析试纸条检测,首次建立了集浓缩样本与免疫层析于一体的黄曲霉毒素M1快速检测法。该方法用于检测原料乳中黄曲霉毒素M1,检出限为0.1μg/L,低于我国制定的黄曲霉毒素M1限量标准(0.5μg/L),与其它真菌毒素和原料乳中常检违法添加物无交叉反应,分析结果与酶联免疫吸附法( ELISA)结果一致。本方法适合现场快速检测原料乳中黄曲霉毒素M1。

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前不久某乳品企业生产的一批产品被检出黄曲霉毒素M1超标，由于黄曲霉毒素的高致癌性，该事件再次引起人们对黄曲霉毒素检测方法的关注。传统的黄曲霉毒素检测需要衍生，

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目的：利用上转发光免疫层析技术（ AFM1-UPT-LF）建立奶粉及牛奶中黄曲霉毒素M1的快速检测方法。方法以UCP颗粒作为标记物，无需样品前处理，采用竞争免疫反应建立AFM1-UPT-LF方法。以AFM1阴性的奶粉、牛奶配制系列浓度AFM1标准品，确定检测方法的灵敏度、特异性、标准曲线与定量范围、精密度、准确度及回收率，并对实际样品进行定性和定量检测评价。结果利用AFM1-UPT-LF可实现奶粉及牛奶中AFM1定性及定量检测，20 min内即可完成。奶粉中检测下限可达0．1μg／kg，在0．1～0．7μg／kg间具有较好线性（r＝－0．99359， P＜0．01），牛奶中检测限为0．3μg／L，在0．3～0．7μg／L间具有较好线性（r＝－0．99938，P＜0．05）。在定性检测中，对奶粉检测灵敏度为100％，特异性为85％，受试者工作特征（ROC）的曲线下面积（AUC）为0．978±0．036；牛奶检测中灵敏度为81％，特异性为88％， ROC的AUC为0．891±0．099；与LC-MS结果进行χ2检验，P值均大于0．05，两种方法差异无显著性意义。在定量检测评价中，AFM1-UPT-LF对于奶粉及牛奶中AFM1检测均具有较好回收率，与LC-MS比较差异无显著性意义（奶粉：t＝0．66，P＞0．05；牛奶：t＝1．01，P＞0．05）。结论利用UPT-LF所建立的AFM1-UPT-LF方法可实现奶粉及牛奶中AFM1定性及定量快速检测，检出限满足国标限量标准要求；该法无需样品处理，操作简便，可满足食品安全中对现场快速检测的需求。

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为实现对黄曲霉毒素M1(Aflatoxin M1,AFM1)的生物降解,建立从环境中筛选AFM1降解菌株的方法并得到降解菌株结果表明:对采自农田、粮库、牛场的300个土壤或粪便样品,初筛选出能在以香豆素为唯一碳源的培养基上生长的菌株37株;用液相色谱法测定降解率进行复筛,得到3株降解率在50％以上的菌株;进而对复筛菌株进行生长条件和耐受性实验,筛选出降解率为78.6％,生长速度快、长势好、稳定期长,且降解过程中热稳定性好的菌株102807 经过菌落细胞形态学、生理生化特征及16S rDNA序列系统发育分析,鉴定为纤维纤维微菌(Cellulosimicrobium cellulans) 首次发现了纤维纤维微菌对AFM1的生物降解功能.

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为研制定性测定羊奶中黄曲霉毒素M1残留的高灵敏度检测卡,在硝酸纤维素膜上预包被黄曲霉毒素M1全抗原作为检测线,在硝酸纤维素膜上预包被羊抗鼠二抗作为质控线.将抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体用胶体金标记作为金标垫.将样品垫、金标垫、预包被黄曲霉毒素M1的硝酸纤维素膜以及吸水垫依次粘贴在PVC板上,切割成4 mm宽的试纸条,将试纸条装入塑料卡壳中扣紧组装成检测卡.样本中残留的黄曲霉毒素M1与硝酸纤维素膜上的检测线共同竞争胶体金标记的黄曲霉毒素M1抗体,检测线的颜色深浅与其残留物黄曲霉毒素M1呈负相关,从而判定样品中黄曲霉毒素M1的含量.结果表明,检测卡的检测限为0.5μg/L,黄曲霉毒素M1检测卡对黄曲霉毒素M1的交叉反应率为100％,而与同族的其他物质的交叉反应率小于5％,与不同族的其他物质的交叉反应率小于1％.假阳性率小于5％,假阴性率为0％,密封好的检测卡常温下储存,保质期18个月.本研究为快速准确地测定羊奶中黄曲霉毒素M1残留提供了物质基础.

摘要:

为明确短小芽孢杆菌CotA漆酶的酶学性质,探究其在黄曲霉毒素M1降解中的应用潜力.经分析,短小芽孢杆菌E-1-1-1中cotA基因全长1486 bp,编码495个氨基酸,无信号肽序列,分子质量约为58 kDa.该重组漆酶最适反应温度为40℃,最适pH 4.0;Km为3.01 mmol/L,Vmax为0.795 mmol/(L·min);金属离子和化学试剂会对酶活力造成不同程度影响,K+、Na+、乙醇和十二烷基硫酸钠对该酶有明显的抑制作用,抑制率分别为31.0％、13.6％、64.5％和100％,而Mn2+和Zn2+则表现出明显的促进作用,酶活力分别提高了33.0％和23.9％;该酶与牛奶中的黄曲霉毒素M1反应72 h后,黄曲霉毒素M1降解率为54.3％,毒性降低9.1％.结果表明,短小芽孢杆菌CotA漆酶作为黄曲霉毒素M1降解酶具有巨大的应用潜力.

摘要:

通过研究南方某市液态乳中黄曲霉毒素M1 (aflatoxin M1,AFM1)污染水平及量化该市居民AFM1急性膳食摄入风险,为其液态乳安全生产、消费及质量安全监管提供依据.基于不同品种奶源采集的379份液态乳样品,运用风险评估软件@Risk,构建基于Monte Carlo模拟法的非参数概率评估模型,对AFM1膳食摄入风险进行概率评估.结果表明:采用高效液相色谱法检测的自2015年12月至2016年5月期间采集的379份液态乳样品中,AFM1检出率为19.79％(共75份),污染平均值为0.19 tg/kg,最高污染水平为0.62 μg/kg.5种不同品种的乳样中AFM1污染平均值依次为样品D (0.22 μg/kg)＞样品A(0.21 μg/kg)＞样品C(0.20 μg/kg)＞样品E(0.18 μg/kg)＞样品B(0.13 μg/kg).运用@Risk软件对不同液态乳中AFM1污染水平检测值进行Pareto、Expon、Laplace等分布拟合,运用赤池信息量准则、贝叶斯信息准则、Chi-Squared、Anderson-Darling和Kolmogorov-Smirnov 5种统计方法进行拟合度检验.结果显示,不同液态乳样品中AFM1污染分布均符合Pareto分布,分别记为Risk Pareto (2.661 5,0.029)、Risk Pareto (3.765 2,0.029)、Risk Pareto (3.370 8,0.029)、Risk Pareto (2.854 6,0.029)和RiskPareto (2.423 5,0.029).基于Monte Carlo模拟和Bootstrap抽样技术,根据液态乳AFM1污染分布特征,结合相关的暴露参数,用@Risk软件进行模拟,当迭代次数为10 000次时,通过饮用不同品种液态乳对AFM1日暴露量的平均值依次为0.000 23、0.000 20、0.000 21、0.000 22、0.000 25 μg/ (kg·d),第99百分位数的AFM1暴露量分别为0.000 82、0.000 49、0.000 57、0.000 73、0.000 97 μg/ (kg·d).根据暴露评估模型,分别用联合暴露边界比和危害指数表征不同人群通过饮用液态乳暴露AFM1的致癌和非致癌风险.结果表明不同人群通过饮用不同品种液态乳暴露AFM1的致癌风险值均显著大于100,而当每日耐受摄入量为0.005 μg/ (kg·d)时,非致癌风险危害指数均大于1,说明针对同一奶源液态乳,虽然不同人群之间致癌和非致癌风险评估结果均存在显著差异,但不同人群通过饮用液态乳摄入AFM1对健康的风险很小.本研究可为液态乳质量安全监管和今后系统开展液态乳质量安全风险评估提供有益借鉴和参考.