摘要:

描述规律成簇的间隔短回文重复（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats，CRISPR）领域技术演化，揭示微生物群基因编辑技术的演进路线，对其技术发展进行深层分析，以期为相关领域的研究人员提供决策参考。方法：计算机检索PubMed和Embase数据库截至2021年5月30日收录的相关文献，筛选微生物群基因编辑技术相关研究。结果：初步检索902篇文献，最终44篇符合纳入标准；研究显示CRISPR技术演进方向主要包括特异性、适应性和多样性，其中60.81%涉及多样性研究、28.38%涉及适应性研究、10.81%涉及特异性研究；围绕基因编辑技术整体研究重点不一，以辅助系统的多样性技术为主。结论：下一代测序技术及人工智能、大数据的发展助力微生物群基因编辑技术研究趋向多元化与细致化，并为其提供了新方向。

摘要:

噬菌体是解决致病菌多重耐药性问题的最佳选择之一,然而噬菌体的宿主特异性使得噬菌体的裂解谱有限,因此研究噬菌体宿主特异性对于噬菌体治疗应用具有重要意义.本研究通过筛选大肠埃希菌宿主菌BL21噬菌体IME253的耐受菌,结合对敏感菌和耐受菌的高通量测序,分析基因组差异,预测噬菌体耐受相关基因,发现耐受与外膜受体蛋白FepA有关.然后利用向导CRISPR/Cas9切开敏感菌epA基因,同时利用Red同源重组系统无痕敲涂fepA基因,证明fepA基因敲除可以导致细菌BL21对噬菌体IME253耐受.本实验利用比较基因组学分析平台,建立了一种宿主耐受噬菌体的分析方法,并且利用CRIPSR无痕敲除技术来验证耐受相关基因,为噬菌体治疗提供理论基础.

摘要:

基因组编辑技术是一种可特异性改变目标基因序列的新兴生物学技术,目前已得到广泛关注.为了解全球及中国在该领域的发展情况,采用文献计量法,对基因组编辑的文献进行整体分析.主要对时间分布、空间分布、主要机构、关键词等进行系统分析,旨在了解当前全球和中国基因组编辑领域的研究态势与研发热点.

摘要:

CAR-T疗法是目前肿瘤免疫疗法中的热点技术,也是一种极具潜力的创新技术.从CAR-T疗法的基本概念出发,梳理了CAR-T技术的发展历史,并对国内外CAR-T技术的相关发明专利申请情况进行了简要分析,最后对CAR-T疗法的技术发展方向作出了展望.

摘要:

分子生物学育种是目前防治番木瓜环斑病毒(PRSV)最有效的方法.早期转基因番木瓜抗病毒的策略是根据“致病菌衍生的抗病性”(PDR)原理,将病毒来源的基因全长序列,转入番木瓜并获得抗性.PDR策略最主要特点依赖于靶目标病毒基因序列相似性,不能有效解决海南的番木瓜环斑病毒遗传多样性复杂的株系.本研究着眼于创制广谱的抗PRSV新策略,用最新的CRISPR/FnCas9基因编辑技术和Golden Gate载体构建系统,依据不同PRSV株系的保守序列分析结果,将5个sgRNA(2个CP sgRNA,2个Nib sgRNA和1个HC-Pro sgRNA)串联在一个载体上,实现一个载体可识别剪切5个位点,从而达到广谱抗PRSV的效果,应对海南地区PRSV株系复杂的问题.目前载体已经进行了测序验证,并在番木瓜上进行了叶片局部瞬时表达,初步表现出对PRSV的抑制效果,这为获得广谱抗番木瓜环斑病毒的番木瓜品种奠定良好基础.

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近年来,CRISPR/Cas系统凭借其操作简单、靶向精准、效率高等优点,在生物学领域的应用潜力备受关注.通过总结CRISPR技术在抗病毒药物潜在靶点筛选、疫苗开发、病毒核酸快速检测、病毒性疾病临床治疗等领域的应用,阐明了CRISPR/Cas系统目前面临的挑战及相应的解决措施.作为一种基因编辑技术,CRISPR/Cas系统可以快捷地筛选出多种病毒的潜在药物靶点;可以改造病毒基因组,为研发基因缺失活疫苗做储备;可以快速准确诊断病毒性疾病,也可以为乙肝、艾滋病等病毒性疾病的治疗提供新方向.CRISPR/Cas系统仍存在致癌风险、脱靶效应以及递送系统的安全准确性不足等问题.随着CRISPR技术的不断完善,该技术必将会给病毒性疾病的检测诊断与预防控制带来重大变革.

摘要:

目的 对四川省鼠疫耶尔森菌(Yersinia pestis)做规律成簇的间隔短回文重复序列(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats CRSIPR)基因分型和地区分布研究,为四川鼠疫防治提供科学依据.方法 对132株鼠疫菌培养和提取核酸,应用3对CRISPR引物对被试菌株DNA进行PCR扩增、测序和分析,确定四川省鼠疫菌的CRSIPR基因型.结果 132株鼠疫菌共发现17种spacer,包括YPa 9种、YPb 5种、YPc 3种,新发现的1种space阵列.所有鼠疫菌株被分为2个CRISPR基因簇(Cc3',Ca7),3个基因型(37'型、22型和sc01型).其中石渠县青海田鼠型菌株基因型为37'型,石渠县人间鼠疫的菌株为22型,德格县旱獭型菌株基因型为22型,巴塘县、理塘县、雅江县和新龙县旱獭菌株基因型为sc01型.结论 四川省鼠疫菌菌株具有明显的地区分布特征.

摘要:

乳酸菌基因组的CRISPR序列是乳酸菌识别并抵御噬菌体侵染的重要元件,其与cas蛋白共同构成了乳酸菌的获得性免疫系统.而目前对乳酸菌CRISPR序列信息研究较少.因此本文对8株不同来源的保加利亚乳杆菌的CRISPR序列进行了克隆测序,对其重复序列进行了遗传进化分析并预测了二级结构,同时进行了间隔序列的同源性分析.结果显示:8株保加利亚乳杆菌均含有长度不一的CRISPR区,最长的CRISPR序列片段长度为1820 bp,含有30条间隔序列,最小的CRISPR片段仅有408 bp,含5个间隔序列.经分析发现CRISPR重复序列的二级结构预测有两类不同的结构,一类以"环"为主的典型RNA二级结构,一类以"茎"为主,前者剪切后具有典型crRNA结构,而后者的功能还有待进一步研究.通过分析保加利亚乳杆菌的CRISPR序列结构,可为保加利亚乳杆菌抗噬菌体的分子机制奠定基础,也对乳品工业筛选抗噬菌体的发酵剂菌株具有指导意义.

摘要:

目的 针对人源的CCL17和CCL22基因进行CRISPR/Cas9-gRNA设计,并验证设计的sgRNA的有效敲除效率.方法 利用CRISPR网站提供的工具对CCL17和CCL22基因的靶向编辑位点进行筛选设计,然后构建CRISPR-Cas9-CCL17和CRISPR-Cas9-CCL22敲除质粒,并将构建好的质粒转入293 T细胞系,然后通过基因组PCR产物的T-A克隆测序方法分别验证设计的sgRNA敲除质粒的编辑效率.结果 成功构建针对于人源CCL17和CCL22基因的sgRNA敲除质粒,并有着良好的编辑效率,均达70％以上.结论 针对CCL17和CCL22基因设计的CRISPR敲除质粒对靶基因有着很好的编辑效果,为后续基于CCL17和CCL22的相关性研究奠定了基础.

摘要:

自2012年首次证明了CRISPR/Cas9可以在体外进行DNA切割试验以来,CRISPR技术逐渐在基因编辑研究中获得了迅速的发展,除了应用于基因编辑领域之外,它在基因表达调控、基因成像、基因分析等方面也展现出了巨大的应用潜力.尤其在基因分析领域,CRISPR技术由于其精确的基因识别、室温的反应条件、易设计性和操作性等特色,使得一系列新型的基因检测技术得以发展,并取得了超越常规技术的一些检测参数.本文以Cas9蛋白为对象,综述了近些年来在该领域取得的研究进展.主要论述Cas9蛋白的功能、改造、引导RNA(sgRNA)的设计及其在基因分析方法上的应用.