人树突状细胞cDNA质粒文库的构建及其大规模随机测序体系的建立

• 作者: 万涛 何龙 曹雪涛 朱学军 章卫平 袁正隆
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 树突状细胞 cDNA文库 大规模测序 免疫分子 基因克隆
• 年，卷（期）: 1999,（6）
• 所属期刊栏目: 分子与细胞免疫学
• 页码范围: 245-249
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 3685字
• 语种: 中文

摘要

目的:建立人树突状细胞(DC)的cDNA文库,通过大规模随机测序克隆免疫新分子.方法:来源于正常人外周血的单核细胞,体外经GM-CSF和IL-4培养,扩增出高纯度的DC,抽提纯化mRNA,转录成cDNA,定向插入pSPORT2.0载体,建立人DC的cDNA质粒文库;用ABI377全自动测序仪对该文库进行随机测序,将得到的EST在Sun-E450服务器中与EMBL及Swissprot数据库进行同源性比较,筛选出代表未知基因EST,然后在GCG软件中进行分析,对重要的未知EST克隆其全长cDNA.结果:所扩增的DC经流式细胞仪分析高表达MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ、B7、CDla和CD83等表面标志,能强烈刺激同种异体T淋巴细胞的体外增殖反应;建立的DC cDNA文库92%以上克隆有平均1.6 kb大小的插入片段;从所测的12 000余条EST中筛选出代表未知基因的3 000余条,克隆到109条全长新基因,包括属于细胞因子、细胞因子受体、趋化因子和粘附分子等家族的免疫新分子,部分全长基因已在Genebank中登录.结论:成功建立了人DC的cDNA基因文库及其大规模随机测序体系,并克隆到免疫分子.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曹雪涛	第二军医大学免疫学教研室	117	1522	19.0	34.0
2	章卫平	第二军医大学免疫学教研室	106	446	11.0	15.0
3	袁正隆	第二军医大学免疫学教研室	5	10	2.0	3.0
4	朱学军	第二军医大学免疫学教研室	5	39	3.0	5.0
5	何龙	第二军医大学免疫学教研室	7	71	5.0	7.0
6	万涛	第二军医大学免疫学教研室	4	19	3.0	4.0