DNA标记杂交技术筛选抗HBs-IFN-α融合蛋白表达载体

• 作者: 叶伟民 孔宪涛 尤长宣 王永奎 罗荣城 韩焕兴
• 来源期刊: 上海免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 融合蛋白表达载体 DNA杂交 人源单克隆抗体 地高辛标记探针
• 年，卷（期）: 2000,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 172-174
• 页数: 3页
• 分类号: R392.11
• 字数: 2031字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-2478.2000.03.013

摘要

为在无抗药性改变,转化细胞无生物指示系统改变的克隆载体中扩大筛选范围,提高筛选阳性率,本文应用地高辛标记DNA检测系统筛选人源单抗片段与干扰素融合蛋白表达质粒(Anti-HBs-IFN-α),取得了理想的效果.纯化制备载体的插入段DNA,用地高辛标记系统进行化学标记,制成标记探针.挑取单克隆菌扩增,以溶菌酶加煮沸法批量制备载体DNA,点样于硝酸纤维膜上并经80℃烤2h,分别用预杂交液和标记探针进行42℃2h、42℃6h的膜预杂交和杂交反应,洗膜后用酶标抗地高辛抗体显色.未带插入片段的抗体表达载体为阴性对照,IFN-α质粒DNA作阳性对照,在40株转化细胞中筛选出7个目的克隆.为进一步核实该法的筛选效率和可靠性,分别用单酶切和双酶切法对筛选出的阳性载体进行鉴定,琼脂糖电泳结果显示,两者的符合率为100%.该系统筛选结果可靠,尤其在克隆载体转化细胞后无抗药改变,无其他筛选特征的载体构建中有一定的优势.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	韩焕兴	第二军医大学长征医院实验科	47	148	7.0	10.0
2	尤长宣	广州第一军医大学南方医院生物治疗中心	2	11	1.0	2.0
3	罗荣城	广州第一军医大学南方医院生物治疗中心	4	22	3.0	4.0
4	叶伟民	第二军医大学长征医院实验科	20	98	5.0	9.0
5	孔宪涛	第二军医大学长征医院实验科	124	1102	16.0	29.0
6	王永奎	第二军医大学长征医院消化科	2	3	1.0	1.0