反义AT1R腺病毒重组体的构建及鉴定

• 作者: 刘志祥 李庚山 杨桂元 涂明利 涂远超 王卫民 王家宁 陈霞萍 黄永章
• 来源期刊: 临床肾脏病杂志
• 关键词: 血管紧张素Ⅱ1型受体 反义 腺病毒 基因扩增
• 年，卷（期）: 2001,（3）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 124-127
• 页数: 4页
• 语种: 中文

摘要

目的构建含人血管紧张素Ⅱ1型受体反义eDNA(AS-AT1R)的重组腺病毒载体,为AS-AT1R抗高血压及其并发症的研究.方法用定向克隆法将人AT1R cDNA反向插入到穿梭质粒pACCMVPLPA的CMV启动子之下,获得重组质粒pAd-AS-hAT1R.后者与pJM17通过脂质体共转染293细胞,经同源重组获得含反义人AT1R基因的重组腺病毒Ad-AS-hAT1R.通过PCR共扩增法鉴定Ad-AS-hAT1R.根据260 nm紫外光吸收值计算病毒滴度.结果 AT1R cDNA成功地反向插入pACCMVPLPA载体,以重组病毒DNA为模板,同时扩增出670 bp的AT1R cDNA片段和860bp的腺病毒骨架基因片段,证实了Ad-AS-hAT1R的正确性.病毒滴度为0.82×10 12 pfu/ml.结论成功构建了携带反义人AT1R cDNA的腺病毒,为AS-AT1R抗高血压的治疗研究奠定了基础.