弓形体RH株抗原基因SAG1的扩增克隆及鉴定

• 作者: 刘彦文 周永安 罗树红 陈观今
• 来源期刊: 山西临床医药
• 学科: 生物学
• 关键词: 弓形体 表面抗原SAG1 鉴定
• 年，卷（期）: 2001,（4）
• 所属期刊栏目: 临床医学
• 页码范围: 249-252
• 页数: 4页
• 分类号: Q943
• 字数: 2201字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8631.2001.04.004

摘要

目的：体外扩增弓形体主要表面抗原SAG1基因，构建pcD NA3-SAG1真核表达质粒，为研制弓形体疫苗奠定基础。方法：采用PCR技术，自行设计一对寡核酸引物(P1，P2)，从弓形体RH株基因组DNA中特异扩增出编码SAG1抗原的基因片段。扩增的目的片段经纯化后用EcoR1和HindⅢ双酶切后，克隆到真核表达质粒pcDNA3中，转化入大肠杆菌TG1，用氨苄青霉素和PCR初筛，将PCR扩增阳性的重组子分别用Sac1单酶切、EcoR1 和HindⅢ双酶切鉴定。结果成功地构建真核型表达质粒pcDNA3-SAG1，从而为进一步SAG1重组抗原的体外表达创造有利条件。结果：从RH株基因组DNA中特异扩增出编码SAG1的全基因序列，扩增目的基因片段大小与预期长度(1025bp)，相符；将分离、纯化的目的基因片段SA G1插入pcDNA3质粒HindⅢ和EcoR1位点，构建重组质粒pcDNA3-SAG1。结论：成功构建重组质粒pcDNA3-SAG1。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周永安		39	130	6.0	10.0