人源性抗HBsAg抗体Fab段噬菌体呈现文库的构建、筛选及阳性克隆核苷酸序列测定

• 作者: 任向荣 余宙耀 杨安钢 高磊 高辉
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肝炎抗原,乙型 抗体 克隆,分子 DNA
• 年，卷（期）: 2001,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 308-311
• 页数: 4页
• 分类号: R512.6+2
• 字数: 2738字
• 语种: 中文

摘要

目的：构建一个经HBsAg主动免疫的人lgG1抗体噬菌体展示文库，通过特异的淘筛(panning)获得与HBsAg有较高亲和力的Fab抗体，并测定其编码序列。方法：从一经乙肝疫苗免疫的自愿者的外周血分离淋巴细胞提取RNA，逆转录合成cDNA。PCR扩增重链Fd和κ轻链cDNA。依次将PCR产物克隆进载体pComb3H相应的位点，构建成噬菌体呈现库，并以HBsAg包被的96孔板对抗体库进行3轮淘筛，将所获克隆分别与HBsAg进行ELISA反应，挑取显色大于对照20倍以上的阳性克隆进行DNA测序。结果：lgG1的Fd段和κ轻链cDNA得到扩增，构建了一实际库容量为1.8×105的噬菌体呈现文库。通过特异性淘筛，获得与HBsAg有较高新合力的3株Fab抗体并测定其编码序列。DNA序列测定结果表明，3株抗体中两株的Fd段完全一样，且3株的轻链完全一样。结论：成功构建了一个经HBsAg抗原免疫的人源抗体Fab段噬菌体抗体库，筛选得到了3株特异性抗体的Fab片段。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨安钢	第四军医大学生物化学教研室	147	801	14.0	21.0
2	高辉	第四军医大学生物化学教研室	21	79	6.0	7.0
3	高磊	第四军医大学生物化学教研室	33	280	10.0	15.0
4	余宙耀	空军广州医院肝病研究所	9	15	2.0	3.0
5	任向荣	空军广州医院肝病研究所	3	10	2.0	3.0