人IκBα基因原核表达质粒的构建及TrxA/IκBα融合蛋白的制备

• 作者: 刘冰榕 程远 陈海锋 黄爱龙
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: IκBα 基因重组 原核表达 融合蛋白
• 年，卷（期）: 2002,（4）
• 所属期刊栏目: 基础免疫学
• 页码范围: 358-361
• 页数: 4页
• 分类号: R392
• 字数: 3601字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0254-5101.2002.04.004

摘要

目的利用基因重组技术构建人IκBα基因原核表达质粒,制备TrxA/IκBα融合蛋白,以便进一步研究IκBα的生物学功能和制备相应抗体. 方法以重组质粒pGEM-T-IκBα为模板,利用PCR方法扩增出带有BamHⅠ和HindⅢ酶切位点的人IκBα基因cDNA,经相应酶切后插入原核表达载体pET-32a(+).重组表达质粒pET32a(+)-IκBα转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达TrxA/IκBα融合蛋白.Western blot试验鉴定表达蛋白.超声波破菌后采用Ni-NTA树脂对TrxA/IκBα融合蛋白进行纯化. 结果酶切鉴定证实人IκBα基因cDNA已插入原核表达载体pET-32a(+).重组表达质粒pET32a(+)-IκBα在大肠杆菌BL21(DE3)中成功地表达了TrxA/IκBα融合蛋白,其相对分子质量(Mr)约为56×103,表达量约占细菌总蛋白的25%.Western blot试验显示TrxA/IκBα融合蛋白与兔抗IκBα多克隆抗体呈特异性免疫反应.经Ni-NTA树脂纯化后,TrxA/IκBα融合蛋白的纯度可高达95%以上. 结论人IκBα基因原核表达质粒的构建及TrxA/IκBα融合蛋白的制备为进一步研究IκBα的生物学功能和制备相应抗体奠定了物质基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	程远	重庆医科大学附属二院神经外科	117	678	13.0	21.0
2	黄爱龙	重庆医科大学病毒性肝炎研究所	236	1190	16.0	23.0
3	陈海锋	重庆医科大学附属二院神经外科	2	4	1.0	2.0
4	刘冰榕	重庆医科大学附属二院消化内科	1	0	0.0	0.0