人FL在大肠杆菌中的表达及表达产物的纯化和生物学活性测定

• 作者: 何维 刘深基 周希亚 娄可佳 张友鸿 杨克恭 陈松森
• 来源期刊: 基础医学与临床
• 学科: 生物学
• 关键词: FL 融合表达 FXa裂解 纯化 DC
• 年，卷（期）: 2002,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 125-129
• 页数: 5页
• 分类号: Q813
• 字数: 2976字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-6325.2002.02.007

摘要

建立人FL(human flt3 ligand, hFL)在大肠杆菌中的高效表达系统,分离纯化重组hFL为其功能和应用研究打下基础.根据大肠杆菌偏爱密码子人工合成hFL基因膜外区DNA片段,由PCR方法获得的hFL基因膜外区DNA片段,经测序证明序列正确.构建表达载体pET30a-Trx-hFL并转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,hFL融合蛋白的表达占菌体总蛋白的60%以上,并以包涵体形式存在.融合蛋白经离子交换层析、分子筛层析纯化,并用FXa切割,切割效率＞80%.切割产物经亲和层析纯化.纯化产物进行Western blot鉴定.纯化的rhFL(recombinant hFL)与GM-CSF及TNFα联合作用,具有良好的刺激DC增殖活性,其增殖能力是GM-CSF+TNFα的2.5倍左右.本文以大肠杆菌为宿主,成功地表达了融合蛋白Trx-hFL.经纯化的rhFL在体外与GM-CSF及TNFα联合使用能有效地刺激人DC的增殖.