萝卜抗真菌蛋白Rs-AFP2基因PCR定点突变及其在大肠杆菌中的表达

• 作者: 刘柱 朱建清 杨志荣 胡新文
• 来源期刊: 西南农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 密码偏爱性 PCR定点突变 萝卜抗真菌蛋白(Rs-AFP2) 表达
• 年，卷（期）: 2002,（3）
• 所属期刊栏目: 植物保护
• 页码范围: 85-89
• 页数: 5页
• 分类号: S330
• 字数: 3323字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-4829.2002.03.020

摘要

根据已报道的萝卜抗真菌蛋白Rs-AFP2基因序列,结合基因及其表达调控中遗传密码的偏爱性,人工合成引物,利用PCR重叠延伸法,使编码序列区的部分核苷酸突变,采用嵌套PCR,迅速克隆到目的基因片段Rs-AFPm,连接到pGEM-T easy载体上,转化大肠杆菌XL1菌株,筛选到阳性克隆.序列分析结果表明,PCR产物全长240bp,有一个阅读框,编码29个氨基酸的信号肽和51个氨基酸的抗真菌蛋白,与突变前的Rs-AFP2基因相比,在编码区第3号氨基酸Lys相差一个碱基(TTG→TTA),第5号氨基酸Gln相差一个碱基(CAG→CAA),第6号稀有密码Arg相差两个碱基(CAG→CGA),但二者编码产生相同.重新合成引物,将切除信号肽的Rs-AFP2基因和Rs-AFPm基因分别克隆到pET-21b(+)质粒载体上,导入大肠杆菌BL21菌株.Tricine-SDS-PAGE电泳显示工程菌中存在6KD左右的目的蛋白带;软件分析显示,突变后pETAFPm的表达产物约为突变前pETAFPo表达产物的2倍;抑菌结果表明,pETAFPm表达产物的抑菌半径大于pETAFP2表达产物的抑菌半径.这些都说明改造后的Rs-AFPm基因与Rs-AFP2基因相比,已有效的提高表达量.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨志荣	四川大学生命科学学院	178	2296	26.0	37.0
2	胡新文	中国热带农科院热带作物生物技术国家重点实验室	32	248	9.0	15.0
3	刘柱	四川大学生命科学学院	5	53	4.0	5.0