人PDGF-A基因的克隆、表达及表达产物的纯化

• 作者: 张萍 费玲玲 陈镔复 鞠躬 黄文晋
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: PDGF-A 克隆 表达 纯化
• 年，卷（期）: 2002,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 339-341
• 页数: 3页
• 分类号: R392.12
• 字数: 2438字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1007-8738.2002.04.009

摘要

目的克隆血小板衍生的生长因子A链(PDGF-A)的基因,并在大肠杆菌中表达.方法利用RT-PCR法,从人肝癌细胞系(HHCC)的总RNA中,扩增PDGF-A的全长cDNA,再用PCR法扩增PDGF-A成熟蛋白的全长编码序列.编码序列经测序验证后,克隆入表达载体pGEX-4T-1中,构建PDGF-A的原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达目的蛋白,并进行谷胱甘肽(GST)亲和层析纯化.结果以RT-PCR扩增的PDGF-A基因的全长为1 255 bp,以PCR扩增得到其成熟蛋白的编码序列为531 bp.构建了PDGF-A基因的原核高效表达载体pGEX-PDGF-A,表达产物主要位于包涵体内.对包涵体蛋白进行变性和复性处理后,利用亲和层析法获得纯化的目的蛋白.结论成功地扩增到PDGF-A成熟蛋白的编码序列,并在大肠杆菌高效表达,为进一步对PDGF-A功能的研究提供了有利的工具.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	鞠躬	第四军医大学基础部神经科学研究所	188	1218	17.0	24.0
2	黄文晋	第四军医大学基础部神经科学研究所	15	141	5.0	11.0
3	陈镔复	第四军医大学基础部神经科学研究所	6	35	3.0	5.0
4	张萍	第四军医大学基础部神经科学研究所	46	249	8.0	13.0
5	费玲玲	第四军医大学基础部神经科学研究所	7	24	3.0	4.0