结核分枝杆菌MPT-64分泌蛋白在原核表达载体中的克隆,表达与鉴定

• 作者: 朱玉贤 汪竟 潘怡 蔡宏
• 来源期刊: 中国人兽共患病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 结核分枝杆菌 分泌蛋白 载体 克隆 表达与鉴定
• 年，卷（期）: 2002,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1-4
• 页数: 4页
• 分类号: R378.91
• 字数: 3355字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2002.04.001

摘要

目的对结核分枝杆菌的一种分泌蛋白MPT-64基因进行克隆,鉴定与表达,为结核病诊断、重组疫苗应用和免疫效应检测打下基础.方法以结核杆菌H37Rv株基因组DNA为模板,用PCR法对基因MPT-64进行扩增,产物与载体质粒pGEX-4T-1构建表达MPT-64的重组质粒,将此重组质粒先转化到E.coli DH5α内抽提质粒,酶切检验,再转化入表达宿主E.coli BL21(DE3)PLysS菌株内,对转化菌株以IPTG进行诱导后,破菌,离心,上清进行SDS-PAGE,通过电转移将胶中蛋白转到硝酸纤维素薄膜上后进行免疫染色,一抗为结核分枝杆菌菌株H37Rv羊抗阳性血清.结果电泳发现转化了重组质粒的菌株有表达蛋白,所表达的蛋白质相对分子质量为50 000,抗体检测有特异带大小为50kDa.结论目的基因克隆到菌株内,重组结核杆菌分泌蛋白MPT-64的成功表达为结核病诊断、重组疫苗应用和免疫效应检测以及上述抗原、抗体的大规模制备打下基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱玉贤	北京大学生命科学学院	53	478	14.0	19.0
2	蔡宏	北京大学生命科学学院	49	262	9.0	13.0
3	潘怡	北京大学生命科学学院	9	104	5.0	9.0
4	汪竟	北京大学生命科学学院	2	12	2.0	2.0