胡萝卜抗冻蛋白基因的克隆及其在E.coli中的表达

• 作者: 刘兵 王宏斌 王树启 王金发 范云
• 来源期刊: 中山大学学报(自然科学版)
• 学科: 生物学
• 关键词: 胡萝卜 冷诱导 抗冻蛋白基因(AFP基因) 克隆
• 年，卷（期）: 2002,（3）
• 页码范围: 52-55
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 2487字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0529-6579.2002.03.015

摘要

对中国的一个胡萝卜品种进行了冷诱导前后幼苗总蛋白组成的比较、分析,SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的结果表明两者在相对分子质量36 000附近有一条蛋白带的差别.由此推测实验的胡萝卜品种在冷诱导过程中有抗冻蛋白(AFP)表达.根据相关的研究结果设计引物,以胡萝卜幼苗基因组DNA为模板,通过PCR扩增得到了长1 099 bp的抗冻蛋白基因.测序结果表明其与GenBank公布的afp序列仅有3个碱基的差别.将此抗冻蛋白基因克隆进大肠杆菌表达载体pGEX4T1,在IPTG的诱导下表达出了含有AFP的约60 000的融合蛋白,证明该AFP基因在原核表达系统中可以正常表达.