Mda7/IL-24基因的克隆及其融合蛋白在E.coli中的表达

• 作者: 刘锟 朱捷 江红 郑晓飞 马群风
• 来源期刊: 军事医学科学院院刊
• 学科: 生物学
• 关键词: 人白细胞介素24 基因克隆 基因表达
• 年，卷（期）: 2004,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 221-224
• 页数: 4页
• 分类号: Q291|Q786
• 字数: 3821字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2004.03.007

摘要

目的:克隆人黑素瘤分化相关基因(melanoma differentiation associated gene,mda-7/IL-24),并在大肠杆菌中表达.方法:从PHA刺激培养的人外周血淋巴细胞提取总RNA,根据mda-7/IL-24基因序列设计引物,用PCR法扩增mda-7/IL-24基因.将mda-7/IL-24基因插入表达载体pET-28a(+)中,构建表达载体pET-28a-mda-7/IL-24,用IPTG诱导目的蛋白在E.coli中表达.通过Western印迹分析对表达产物进行鉴定.结果:经RT-PCR从人外周血分离的淋巴细胞中扩增到mda-7/IL-24 cDNA,序列分析与文献报道一致;SDS-PAGE分析表明,经0.5 mmol/L IPTG 37℃诱导4 h后在E.coli中有大量mda-7/IL-24融合蛋白表达,相对分子质量约为28×103,融合蛋白约占诱导菌总蛋白的30%;Western印迹分析提示,诱导表达产物能与His单抗发生特异性反应.结论:从人外周血淋巴细胞中获得了mda-7/IL-24的全长cDNA,融合蛋白在E.coli中获得高效表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郑晓飞	军事医学科学院放射医学研究所	53	237	7.0	11.0
2	朱捷	军事医学科学院放射医学研究所	26	95	6.0	7.0
3	刘锟	第四军医大学唐都医院胸外科	84	495	12.0	15.0
4	马群风	第四军医大学唐都医院胸外科	20	66	5.0	7.0
5	江红	军事医学科学院放射医学研究所	18	71	5.0	6.0