腐蹄病C型节瘤拟杆菌纤毛蛋白基因的克隆与表达载体的构建

• 作者: 刘晓颖 刘艳环 张洪涛 徐敏 王克坚 苗利光 陈立志
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 腐蹄病 C型节瘤拟杆菌 基因克隆
• 年，卷（期）: 2002,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 59-62
• 页数: 4页
• 分类号: S813.3
• 字数: 2962字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-5038.2002.02.018

摘要

用PCR技术从腐蹄病C型节瘤拟杆菌克隆出具有免疫保护性抗原0.85kb纤毛蛋白基因(pili基因),利用该基因构建了纤毛蛋白基因表达载体.提取C型节瘤拟杆菌染色体DNA;用所设计的专一性引物进行PCR,扩增出pili基因;将pili基因克隆于TE载体,TE-pili重组质粒pili基因序列测定结果正确,用EcoRⅠ酶切,低熔点胶回收pili基因片段,经klenow补平后,用T4DNA连接酶将其与中间载体pPL连接,将plli基因克隆于pPLλ载体,经BamH I、BamH I+HndⅢ、Dral酶切鉴定pili基因正向插入pPL体;扩增pPL -pili重组质粒,用BamH I酶切出2.1kb大小片段,回收后,与PME290表达质粒连接,转化宿主细胞PAK/2pfs中,对获得的重组质粒用BamH I酶切,出现2.1kb大小的带,证明含有目的基因.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	苗利光		6	9	2.0	2.0
2	王克坚	中国农业科学院特产研究所	15	68	6.0	7.0
3	刘艳环		5	9	2.0	2.0
4	陈立志	中国农业科学院特产研究所	33	70	5.0	6.0
5	刘晓颖	中国农业科学院特产研究所	32	68	5.0	7.0
6	徐敏		2	5	2.0	2.0
7	张洪涛	中国农业科学院特产研究所	11	66	6.0	8.0