中国强毒钩端螺旋体膜蛋白基因的真核表达及基因免疫

• 作者: 张会东 晏菊芳 李学敏 胡昌华 鲍朗
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 钩端螺旋体 基因 表达 DNA疫苗
• 年，卷（期）: 2002,（4）
• 所属期刊栏目: 疫苗学
• 页码范围: 407-410
• 页数: 4页
• 分类号: R392
• 字数: 4017字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0254-5101.2002.04.017

摘要

目的检测含有强毒赖型钩体OmpL1外膜蛋白基因的2个重组质粒pBC-OmpL1和pcDNA3-OmpL1在哺乳动物细胞中的表达,及其作为DNA疫苗诱导小鼠体液免疫应答的效果. 方法采用脂质体转染法,以重组质粒转染COS7细胞,通过抗性标志筛选稳定转染入质粒的细胞,RT-PCR和Western blot检测被转染细胞OmpL1基因的表达情况.然后,将重组质粒以肌注法免疫BALB/c小鼠,每2周1次,共3次,ELISA检测小鼠的体液免疫应答水平. 结果 RT-PCR结果显示,重组质粒转染组在约1kb处出现特异的扩增带;Western blot检测显示,重组质粒转染组总蛋白样品在相对分子质量(Mr)为33.5×103处出现特异的蛋白带,而空质粒载体转染组均没有此相应的DNA或蛋白质条带.两质粒第2次免疫小鼠2周后,100μg重组质粒pBC-OmpL1和pcDNA3-OmpL1 DNA免疫组产生了效价为1/19683的高滴度抗体,注射50μg pcDNA3-OmpL1+50μg pcDNA3的小鼠产生滴度为1/6 561较高的抗体,第3次免疫2周后,抗体水平下降. 结论两重组质粒者均能在体外培养的哺乳动物细胞中表达钩体OmpL1蛋白质,以其免疫小鼠后,均诱导产生高滴度的特异性抗体,其效价与全钩体疫苗相当.