真核表达载体pIRES2-EGFP-NT3的构建及在豚鼠耳蜗成纤维细胞中的表达

• 作者: 杨安纲 王成济 王锦玲 邓志宏 邱建华 金明 高下
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: NT-3 基因克隆 真核表达载体 成纤维细胞
• 年，卷（期）: 2002,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 528-530
• 页数: 3页
• 分类号: R322.85
• 字数: 3024字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1007-8738.2002.06.003

摘要

目的构建真核表达载体pIRES2-EGFP-NT3, 并观察其在豚鼠耳蜗成纤维细胞中的表达及分布.方法用RT-PCR法, 从人肝脏组织中克隆NT3-cDNA基因, 构建真核表达载体pIRES2-EGFP-NT3, 并经PCR及EcoR I/BamH I双酶切鉴定.用脂质体介导的方法, 将用真核表达载体pIRES2-EGFP-NT3瞬时转染豚鼠原代耳蜗成纤维细胞. 转染48 h后,分别在荧光显微镜下及用免疫组化法观察转染细胞中NT-3的表达.结果人NT-3 cDNA的PCR产物约为744 bp.序列测定结果用BLAST软件进行同源性比较, 同源性为100%.经EcoR I/BamH I双酶切证实, NT-3 cDNA已成功地克隆到真核表达载体pIRES2-EGFP中.用脂质体介导法,将pIRES2-EGFP-NT3瞬时转染豚鼠原代耳蜗成纤维细胞, 在荧光显微镜下观察到呈绿色荧光的成纤维细胞. NT-3免疫组化染色结果显示,转染NT-3基因的成纤维细胞胞浆呈棕黄色着色; 而转染空载体的成纤维细胞免疫组化染色呈阴性.结论成功地构建真核表达载体pIRES2-EGFP-NT3, 并在豚鼠耳蜗原代成纤维细胞中表达, 为NT-3基因转染治疗致聋豚鼠耳蜗动物试验奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邱建华	第四军医大学西京医院耳鼻喉科	204	900	13.0	18.0
2	邓志宏	第四军医大学西京医院耳鼻喉科	43	215	7.0	12.0
3	王锦玲	第四军医大学西京医院耳鼻喉科	139	800	14.0	20.0
4	金明	第四军医大学生物化学与分子生物学教研室	29	124	6.0	9.0
5	王成济	第四军医大学生物化学与分子生物学教研室	56	326	8.0	15.0
6	高下	第四军医大学西京医院耳鼻喉科	19	42	4.0	5.0